应用转基因技术体外培养表达人碱性成纤维细胞生长因子
的视网膜色素上皮细胞
吴宏  王桂云  张晓光  张绍昆
　　[摘要] 目的  探讨应用转基因技术体外培养稳定表达人碱性成纤维细胞生长因子(basi
c fibroblast growth factor，bFGF)的视网膜色素上皮 (retinal pigment epithelium, RP
E) 细胞的可行性。方法  构建以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)作为标记
基因的人bFGF真核表达载体pcFG。应用脂质体介导法转染人RPE细胞，以G418筛选出表达bFGF
的RPE细胞，并进行细胞克隆，传代培养4周。于荧光显微镜下观察GFP的表达情况，用原位杂
交和免疫组织化学染色法检测bFGF在RPE细胞的表达情况。结果  酶切结果证实含有GFP的真核
表达载体pcFG构建正确。在荧光显微镜下可见RPE细胞表达绿色荧光蛋白。经原位杂交和免疫
组织化学染色证实，转染pcFG后的RPE细胞内有大量bFGF-mRNA的转录蛋白表达。结论  应用转
基因技术可体外培养稳定表达bFGF的RPE。
　　[关键词]  碱性成纤维细胞生长因子；  色素上皮，眼；  转基因
　　
Stable expression of human basic fibroblast growth factor gene in retinal pigmen
t epithelial cells by gene transfer procedures  WU Hong*, WANG Gui-yun, ZHANG Xia
o-guang.*Department of  Ophthalmology, The Second Hospital, Jinlin University, Ch
angchun 130041,China

　　[Abstract]  Objective  The purpose of the present study was to explore wheth
er gene transferred retinal pigment epithelial cells (RPE) can constantly express
 human basic fibroblast growth factor gene (hbFGF) and to study the feasibility o
f using this procedure for the treatment of retinitis pigmentosa. Methods  Plasmi
d carrying hbFGF [using green florescent protein (GFP) as a reporter gene] was co
nstructed and transferred into the RPE cells by lipofectamine. The positively exp
ressed cell clones were selected with G418 and cultured for 4 weeks. Expression o
f GFP gene was identified by the fluorescence microscope. Expression of hbFGF in 
the RPE cells was determined by in situ hybridization and immunohistochemical met
hods. Results  Reconstruction enzyme digestion demonstrated that the eukaryotic e
xpression pcFG was constructed correctly. Expression of GFP protein in the gene t
ransferred RPE was detected under the fluorescence microscope.  Enzyme digestion 
and agarose gel electrophoresis analysis showed that the gene transferred RPE exp
ressed the hbFGF gene. Conclusions  RPE cells are able to express hbFGF gene stab
ly by gene transfer procedures.
　　[Key words]   Basic fibroblast growth factor;    Pigment epithelium of eye; 
  Transgenes   






疱疹性口腔炎病毒G蛋白/胸苷激酶逆转录病毒载体
转移人视网膜色素上皮细胞及其表达
王方 王红卫 卢大儒 薛京伦 张皙 
　　【摘要】 目的 应用新型逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex
 virus-thymidine kinase，HSV-TK）基因转移, 探讨丙氧鸟苷（ganciclovir，GCV）对HSV-
TK基因修饰人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells, RPE）的杀伤抑制
作用。 方法 生产制备高滴度疱疹性口腔炎病毒G蛋白（vesicular stomatitis virus-G pro
tein，VSV-G）/TK和VSV-G/LacZ病毒，对NIH3T3细胞进行VSV-G/TK滴度测定；VSV-G/LacZ 感
染CRL2302细胞后，以X-gal染色估计感染率；对CRL2302细胞、分离培养的RPE细胞和NIH3T3细
胞感染不同病毒滴度的VSV-G/TK ，结合GCV作用观察3种细胞生长抑制率。 结果 VSV-G/TK滴
度为1.2×108克隆形成单位/ml；VSV-G/LacZ感染CRL2302细胞的X-gal染色蓝染细胞率为58％
；当感染复数为200时可最大的抑制细胞生长，抑制率为45％。 结论  VSV-G逆转录病毒可以
介导LacZ、HSV-TK基因在离体细胞NIH3T3和人RPE细胞中高效转移和表达。被HSV-TK基因修饰
的细胞对GCV作用敏感，其生长受到抑制。
   
   【关键词】  载体蛋白质类； 疱疹病毒科； 胸苷激酶； 色素上皮，眼

Exogenous advanced glycosylation end products induce diabetes-like vascular dysf
unction in normal rats: A factor for occurrence of diabetic retinopathy  LI Zhi-p
ing*, XU Xun, HUANG Yu-feng, ZHU Jian-feng, WANG Xiao-jue, HU Hong-hui, HE Zh-ipi
ng *Department of Ophthalmology, Shanghai 1st People’s Hospital, Shanghai 20080,
 China

　　[Abstract]    Objective  Advanced glycosylation end products (AGE) have been
 implicated in the pathogenesis of various complications of diabetes especially i
n diabetic nephropathy. The present study tried to disclose the relationship betw
een the AGE deposition in the retinal vascular tissues and damage of retinal vess
els in diabetic retinopathy. Methods  Sixteen SD rats were divided into 4 groups,
 with 4 rats in each group. Normal group consisted rats without any treatment. Di
abetes was induced by AGE in the diabetes group.  Rat serum albumin (RSA, 40 mg/k
g weight) was administered daily to healthy non-diabetic rats through tail veins 
for 2 weeks (RSA group). AGE-modified RSA was injected to another group of rats a
t the same route and dosage (AGE-RSA group). The number of pericytes in retinal c
apillary vessels was counted 2 weeks later. Results  After two weeks continuous A
GE treatment, the average amount of pericytes of capillary vessel per 10 microsco
pe visual field (x 100 magnification) in AGE group (4.313±0.34) was significantl
y less than that of RSA group (5.798±0.481) (P<0.01). Meanwhile, in the AGE-RSA 
group, AGE were identified in the retinal vascular tissues by immunohistochemical
 staining. Conclusions  Injection of exogenous AGE into healthy rats induces vasc
ular changes resembling those find in the diabetic retinopathy. AGE might be one 
of the independent pathogenic factors in the occurrence of diabetic retinopathy.
       [Key words]  Diabetic retinopathy (DR);   Retinal vessels;    Glycosylati
on end products (AGE)















一个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系             
疾病基因排除性定位分析          
刘征  邓昊  席兴华  夏家辉  潘乾  戴和平  杨永佳  邓汉湘  夏昆  郑多
　　[摘要]  目的  确定一个常染色体显性遗传视网膜色素变性（autosomal dominant ret
initis pigmentosa, ADRP）家系中的疾病基因与3号染色体视紫红质基因的关系。方法  选择
一个连续5代发病的ADRP家系，采集到该家系中16个正常个体、18个受累个体的血样。选取3号
染色体上的14对用6-FAM、HEX、NED 3种荧光染料标记的微卫星标记DNA引物，对该家系进行连
锁分析。结果  3号染色体上的14对微卫星NDA标记位点的LOD值均≤-2，证实3号染色体上的1
4对微卫星标记DNA位点与该家系致病基因不连锁。结论  该家系的致病基因位于其他染色体上
。
　　[关键词]  视网膜炎；色素性； 微卫星标记； 连锁分析 

Exclusive gene mapping on retinitis pigmentosa with markers on chromosomes 3 in 
a Chinese kindred  LIU Zheng*, DENG Hao, XI Xing-hua, XIA Jia-huei, PAN Qian, DAI
 He-ping,  YANG Yong-jia, DENG Han-xiang, XIA Kun，ZHENG Duo.  *National Laborato
ry of Medical Genetics of China, Central South University, Changsha, 410078, Chin
a

　　[Abstract]  Objective  To study the relationship between the rhodopsin gene 
on 
chromosome 3 and autosomal dominant retinitis pigmentosa (ADRP) in a Chinese kin
dred. Methods  Sixteen normal persons and 18 RP patients in a ADRP family were re
cruited. Genome scan method based on fluorescence labeled (using 3 different labe
ls: 6-FAM, HEX, and NED) microsatellite markers with multiplex PCR system was use
d to identify loci influencing susceptibility to ADRP. Fourteen microsatellites (
D3S1297, D3S1263, D3S1266, D3S1289, D3S1300, D3S3681, D3S1271, D3S1292, D3S1569, 
D3S1279, D3S1614, D3S1262, D3S1580 and D3S1311) on chromosome 3 were used as gene
tic markers. Linkage analysis (using Genescan3.0, GeneScan Analysis 2.1, Genotype
r 2.1 and Designer sofe system) was performed using these markers. Results  The L
OD value was ≤-2 in all 14 microsatellites in chromosome 3, indicating that ther
e was no linkage between these markers and RP related gene in this kindred. Concl
usion  The RP related gene in this kindred is located on chromosomes other than c
hromosome 3 and is not caused by the mutation of rhodopsin gene.
　　[Key words]    retinitis pigmentosa;   microsatellite markers;   linkage ana
lysis    








Yk2001-0978  线条3版（3张） 黑白2版（3张） 彩色3版（5张）   ·论著·
外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人
晶状体上皮细胞周期的影响
吴明星1  李绍珍  曾骏文  刘奕志  

　　[摘要] 目的  研究细胞周期蛋白激酶抑制因子（cyclin-dependent-kinase inhibitor
, CKI）p21基因转染对人晶状体上皮细胞（lens epithelial cells, LEC）周期调控的影响，
在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性。方法  构建含人p21基因真核表达载体质粒pcDN
A3/p21, 采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE-B3，使用流式细胞仪观察细胞
生长和周期的变化，并采用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase ch
ain reaction, RT-PCR）方法检测p21mRNA的表达；分别采用免疫组化和免疫印迹（western 
blotting，WB）方法检测p21蛋白的表达。结果  体外构建的载体质粒pcDNA3/p21经酶切鉴定
含有人p21基因全长cDNA片段。基因转染后细胞HLE-B3经传代培养，48h后出现缓慢生长且部分
细胞漂浮死亡的现象，G1期细胞明显增多。与对照细胞比较，转染后细胞的p21mRNA表达明显
增多；p21蛋白表达明显增强，经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为2100
0的阳性蛋白带。 结论  外源性p21基因可在人LEC系HLE-B3中过度表达，并对细胞周期调控产
生抑制作用。基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径。
　　[关键词]  细胞周期；细胞周期蛋白；基因；转染；上皮细胞；晶体 
　　
　　
　　
Effects of exogenous p21 gene on cells cycle of human lens epithelial cells     
  WU Ming-xing, LI Shao-zhen, ZENG Jun-wen, LIU Yi-zhi. Zhongshan Ophthalmic Cent
er, Zhongshan University, Guangzhou 510060，China

　　[Abstract]  Objective  To investigate the effects of transfected exogenous p
21 gene on the cells cycle of HLE-B3 cells line. The feasibility of prevention of
 secondary cataract by gene therapy was evaluated. Methods Total length of human 
p21 gene cDNA was cloned on the parent’s plasmid pcDNA3 to construct the recombi
nant plasmids of pcDNA3/p21, a large amount of pcDNA3/p21 plasmid DNA was prepare
d by QIAGEN endofree maxi kit. After harvest of the plasmid DNA, the HLE-B3 cells
 line was transfected. The cell growth was observed and the cells cycle was analy
zed by flow cytometry. The expression of p21 mRNA was detected by RT-PCR and the 
expression of p21 protein was detected by immunohistochemistry and western blot a
nalysis. Results  Forty eight hours after transfection, the growth of transfected
 cells became slower, some cells floated and died; the control cells and blank pl
asmid (blank pcDNA3) transfected cells grew normally. Flow cytometry analysis rev
ealed that the number of cells in G1 phase increased markedly in transfected cell
s. The RT-PCR showed that the product of p21 in the transfected cells (dead or al
ive cells) was obviously higher than that of the controls. Immunohistochemical st
udies showed few positive cells in the controls, and very high positive signal wa
s detected after transfection. Western blot showed a positive band at the level o
f 21 000 in transfected cells, no positive band could be found in the controls. C
onclusion  Exogenous p21 gene can transfect the HLE-B3 cells and can be expressed
. The transfection can affect the cells cycle by G1 arrest and induces cells deat
h through the apoptosis process. This result suggests that it is possible to prev
ent the occurrence of secondary cataract by gene therapy. 
　　[Key words]   Cell cycle；Cell cycle proteins；Genes；Transfection；Epitheli
al cell； Lens     








左旋精氨酸对兔眼AⅡ无长突细胞及开放性视锥型
双极细胞间示踪剂藕连的调控研究
夏晓波  黄佩刚  蒋幼芹  Stephen L Mills
　　【摘要】  目的  探讨兔眼视网膜AⅡ无长突细胞（AⅡ amacrine cell,AⅡ-AC）和开放
性视锥型双极细胞（on cone bipolar cell, ON-CB）间缝隙连接通道的相对通透性及左旋精
氨酸对通道的调节。 方法  单个AⅡ-AC显微注射神经生物素（neurobiotin,NB）后，采用共
焦显微镜测定以上两类异源型细胞群中NB的分布，并用4 mmol/L左旋精氨酸对其进行调节。然
后用兔抗Calretinin抗体对注射后的视网膜进行免疫组织化学染色。 结果  藕连的ON-CB中的
NB的浓度低于藕连的AⅡ-AC中NB的浓度。与藕连的AⅡ-AC比较，左旋精氨酸选择性的减少了与
AⅡ-AC藕连的ON-CB中的NB的浓度（t=2.511,P<0.05）。AⅡ-AC被Calretinin抗体染色阳性。
 结论  相对于AⅡ-AC 和ON-CB间可能的异源型缝隙连接，NB较易通过AⅡ-AC间的同源型缝隙
连接。左旋精氨酸可能使cGMP浓度升高而作用于双极细胞侧的缝隙连接，选择性的减少了这种
双极细胞的示踪剂标记。
　　【关键词】  AⅡ无长突细胞； 双极细胞； 缝隙接合部；  神经生物学；  精氨酸； 
 动物，实验
     

Modulation of tracer coupling in AⅡ amacrine cells and ON cone bipolars of rabb
it retina by L-arginine Xia Xiao-bo*, Huang Pei-gang, Jiang You-qin, Stephen L Mi
lls. *Department of Ophthalmology, Xiangya Hospital of Central South University, 
Changsha 410008, China.

     【Abstract】  Objective   To determine the relative permeability of the gap
 junction pathways in AⅡ amacrine cells and ON cone bipolar cells of rabbit reti
na, and its modulation by L-arginine. Methods   The distribution of neurobiotin a
cross the heterologous cell assembly was measured using the confocal microscope a
fter microinjecting neurobiotin into a single AⅡ amacrine cell. Modulation of th
e tracer coupling by 4 mmol/L L-arginine was also observed. Rabbit anti-calretini
n antibody was used to stain the retina injected with neurobiotin.  Results   Ave
rage neurobiotin concentration in the coupled ON cone bipolar cells was lower tha
n that in the coupled AⅡ amacrine cells. L-arginine selectively reduced the conc
entration of neurobiotin in the ON cone bipolar cells, this effect was more promi
nent than that observed in the AⅡ amacrine cells (P<0.05). AⅡ amacrine cells st
ained with anti-calretinin antibody.   Conclusions   Neurobiotin can pass easily 
through homologous AⅡ/AⅡ cells gap junctions as compared to the heterologous AⅡ
/bipolar cells gap junctions. L-arginine reduces the labeling of neurobiotin in O
N cone bipolar cells to a greater degree than in AⅡ amacrine cells. The pathway 
of this effect is probably by increasing the level of cGMP and acting at the bipo
lar cell side of this gap junction. 
     【Key words】  AⅡ amacrine cell;   Bipolar cell;   Gap junctions;   Neurob
iotin;  Arginine; Experimental animal





糖基化终产物诱导牛视网膜毛细血管
周细胞凋亡及凋亡调节基因的表达
陈百华  姜德咏  唐罗生
　　[摘要]  目的  研究糖基化终产物（advanced glycosylation end products，AGE）对
培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bax、bcl-2表达的影响，以探讨糖尿病视
网膜病变的发病机制。方法  在体外培养3～6代近融合的视网膜毛细血管周细胞中加入不同浓
度的AGE（8、32、125、500及2 000 mg/L）液，于4 d后检测不同浓度AGE对牛视网膜毛细血管
周细胞凋亡及凋亡调节基因Bax、bcl-2表达的影响。结果  周细胞与AGE作用4 d后，呈现出典
型的细胞凋亡特征；AGE促周细胞凋亡(r=0.878，P<0.01)和凋亡调节基因Bax的表达(r = 0.8
55,P<0.01)及抑制凋亡调节基因bcl-2的表达(r =-0.850,P<0.01)呈剂量依赖性；而周细胞凋
亡率与Bax/bcl-2的比率呈正相关(r=0.808, P<0.01)。结论  AGE能以剂量依赖的方式促进周
细胞的凋亡，周细胞的凋亡率取决于凋亡调节基因Bax/bcl-2的比率。细胞凋亡是糖尿病视网
膜病变中毛细血管周细胞早期丧失的一种方式。
　　[关键词]  糖尿病视网膜病；糖基化终产物，高级；周细胞；脱噬作用
　　



Advanced glycation end products induce apoptosis and expression of apoptotic gen
es in cultured bovine retinal capillary pericytes CHEN Bai-hua, JIANG De-yong, TA
NG Luo-sheng. Department of Ophthalmology, Second Xiangya Hospital, South Center 
University , Changsha 410011, China

　　[Abstract]   Objective  The purpose of the present study was to examine whet
her advanced glycation end products (AGE) contribute to the development of apopto
sis and expression of apoptotic genes in cultured bovine retinal capillary pericy
tes (BRPs),in order to investigate retinal microvascular pathologic process durin
g early stage of diabetic retinopathy. Methods  After a 4 day incubation with var
ious concentrations of AGE (8, 32, 125, 500, 2000 mg/L) which were prepared in vi
tro by incubating bovine serum albumin (BSA) with glucose, we studied the degree 
of apoptosis and the expressions of apoptotic genes (Bax and bcl-2) in BRPs by st
aining with the Annexin V-FITC and propidium iodide (PI), terminal deoxynucleotid
yl transferase mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) and immunohistochemistry. 
Results  （1）After a 4 day incubation with various concentrations of AGE, BRPs s
howed typical changes of apoptosis, i.e. shrunken cell size, nuclear condensation
 associated with DNA fragmentation, a relatively intact cell membrane, and loss o
f cell viability eventually.（2）AGE could induce significant apoptosis of BRPs i
n a dose-dependent manner as compared with normal cultures or the albumin group n
ot treated by glucose. (r = 0.878，P <0.05).（3）After a 4 day incubation, the le
vel of pro-apoptotic gene Bax was upregulated (r=0.855,P<0.01), whereas the level
 of pro-survival gene bcl-2 was downregulated by AGE in a dose-dependent manner (
r=0.850, P<0.01).（4）There was a positive correlation between apoptotic rate and
 Bax-bcl-2 ratio of BRPs induced by AGE (r=0.808,P<0.01).Conclusions  AGE can ind
uce a significant apoptosis of BRPs in a dose-dependent manner and the rate of ap
optosis was determined by the Bax/bcl-2 ratio. These results suggest that the sel
ective loss of pericytes in diabetic retinopathy involves an apoptotic process.
　　[Key words]  Diabetic retinopathy；Glycosylation end products，advanced；Per
icytes；Apoptosis





眼眶减压术治疗30例恶性突眼的疗效分析
何为民  罗清礼  曾继红  夏瑞南
　　【摘要】  目的  评价眼眶减压术治疗严重恶性突眼患者的疗效。方法  采用眼眶减压
术治疗30例（34只眼）恶性突眼患者，其中二壁减压术22只眼，三壁减压术12只眼。术后随访
3个月至9年，平均4.5年。观察患者术后视力、眼球突出度、眼球活动度及外观情况。结果  
34只眼术后眼睑均能完全闭合。视力：提高25只眼，无改变5只眼，下降4只眼。眼球突出度：
二壁减压术后（3.8 mm）较术前（22.3 mm）明显减小，三壁减压术后（7.1 mm）较术前（25
.7 mm）明显减小。结论  眼眶减压术是治疗严重恶性突眼的有效方法。
   【关键词】  格雷夫斯病；突眼；减压术，外科

Observation of clinical results of orbital decompression in 30 cases of malignan
t exophthalmos HE Wei-min，LUO Qing-li，ZENG Ji-hong，XIA Rui-nan. Department of 
Ophthalmology, Huaxi Hospital, Sichuan University，Chengdu 610041，China

    [Abstract]  Objective  To evaluate the effectiveness and safety of orbital d
ecompression for the treatment of malignant exophthalmos. Methods  Thirty four ey
es of malignant exophthalmos were followed-up for 3 months to 9 years (averaged 6
 years) after orbital decompression (two walls decompression in 22 eyes, three wa
lls decompression in 12 eyes,). The postoperative vision, protrusion value and ap
pearance of the patients were examined and analyzed. Results  Complete closure of
 palpebral fissure was attained in all cases and the visual acuity was increased 
in 25 eyes, remained the same in 5 eyes and decreased in 4 eyes. The mean recessi
on of exophthalmos after operation was 3.8 mm in two walls decompression and 7.1 
mm in three walls decompression, respectively. Conclusion  Orbital decompression 
is an effective method for the treatment of malignant exophthalmos.
　　    [Key words]  Graves’ disease；Exophthalmos；Decompression，surgery