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| 细菌内同源重组法构建LEDGFp52基因腺病毒载体及其体外表达 |
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作者：赵海生 … 文章来源：第三军医大学西南眼科医院 重庆400038 点击数： 更新时间：2006-7-7 13:43:43 
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| 目的:
1构建表达人类晶状体来源的上皮生长因子p52(LEDGFp52)重组腺病毒载体。
2检测LEDGFp52重组腺病毒能否在真核细胞中有效表达目的基因。
方法:
1 腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52的构建 将LEDGFp52基因片段亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上。
2 E.coli内同源重组构建pAdLEDGFp52腺病毒载体 将腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌，经细菌内同源重组产生携带LEDGFp52基因的重组腺病毒载体pAd-LEDGFp52。 3 重组腺病毒Ad- LEDGFp52的包装 将pAd-LEDGFp52经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52。
4 目的基因LEDGFp52在真核细胞中的表达 将Ad-LEDGFp52体外转染293细胞，CPE法观察目的基因的表达.
结果:
1构建了表达LEDGFp52基因的重组腺病毒质粒，E.coli 内成功同源重组腺病毒。
2 在293细胞内包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52, 滴度可达5×1012 pfu/L。
3在真核细胞中有效表达目的基因LEDGFp52,出现显著的CPE效应。
结论:
成功构建表达HBsAg 和HBeAg的重组腺病毒载体，为进一步进行LEDGF p52基因功能的研究提供了实验基础。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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