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| 荧光金逆行示踪技术对视网膜神经节细胞存活率的研究 |
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作者：任蕾 王… 文章来源：第三军医大学西南眼科医院 400038重庆 点击数： 更新时间：2004-6-10 
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| 目的 研究荧光金(fluro-gold FG)逆行示踪技术在准确计数正常及损伤的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells RGCs）中的应用。
方法 正常成年Long evans大鼠20只，体重270±20g，雌雄不限。按对照组（n=4）、损伤后7、14、21天（各组n=4）分组。在行球后视神经钳夹伤前7天行FG逆行标记。动物麻醉成功后，固定在大鼠立体定位仪上，沿正中线切开颅顶头皮，开睑器撑开头皮，彻底止血，暴露失状缝及顶间缝，确定Bregma点。根据大鼠脑立体定位图谱确定双侧上丘（(Bregma点后移6.8±0.2mm，旁开1.6±0.2mm)及外侧膝状体(Bregma点后移4.6±0.2mm，旁开4.0±0.2mm)。用电钻在相应颅骨表面投射点钻直径约为1mm的孔。5μl微量注射器吸取2%FG按图谱所示的深度——上丘为4±0.2mm，外侧膝状体为5.6±0.2mm——于各孔内徐徐注入1μl FG。7天后损伤组各大鼠用反向血管夹于球后2mm处夹视神经10s。分别于各时间点将大鼠用4%多聚甲醛灌注固定后，行全视网膜铺片，3小时内在荧光显微镜下观察。拍摄200×的荧光照片。在每张视网膜的上、下、鼻、颞侧距视乳头1/6、1/2、5/6处共拍摄12张照片。对照片上标记的RGCs进行计数，求平均值，计算损伤后各时间点剩余的RGCs与正常视网膜中RGCs的百分比。
结果 视网膜铺片的RGCs 边界清晰，并可见明显的细胞突起，血管走行区未见节细胞存在。正常组每张铺片的平均节细胞数为113±15/mm2, 损伤7天存活率为73% 14天存活率为51%，21天存活率为45%。
结论 荧光金逆行标记是评价视神经损伤后视网膜节细胞存活率可靠并且有效的方法。
关键词：荧光金逆行标记，视网膜神经节细胞
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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