|
| 牛视网膜S抗原的制备与提纯 |
|
作者：原莉莉 … 文章来源：天津市眼科医院 300040 点击数： 更新时间：2004-7-2 
|
|
| 目的 实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）与人类内因性葡萄膜炎的病理特征相似，对眼内炎发病机制和免疫遗传学的研究很有价值，常用作免疫治疗的疾病模型。EAU可由多种不同的视网膜蛋白诱发，其中视网膜可溶性抗原（S-Ag）具有强烈的抗原性及致色素膜炎活性，它所诱发的葡萄膜炎以玻璃体腔T细胞增殖为特征，具有特殊意义。因为S抗原的致色素膜炎活性与其纯度呈正比，所以S抗原的纯化尤为重要。我们对Al-Mahdawi等的方法进行改进简化，获得了较高纯度的牛视网膜S抗原，为进一步研究色素膜炎的免疫机制及治疗奠定了实验基础。
方法 冰浴下暗室解剖新鲜牛眼，取视网膜组织匀浆，离心后取上清液，磁力搅拌下逐滴加入等体积的饱和硫酸胺溶液沉淀过夜。离心后用Sephadex G100凝胶常规装柱加样，紫外监测蛋白洗脱峰，然后透析浓缩，应用Bradford法测定蛋白含量，免疫Wister大鼠鉴定抗原免疫活性。
结果 由低张缓冲液制成的视网膜匀浆含有十多种较高浓度的蛋白，硫酸铵盐析可除去大部分杂蛋白，S抗原所占比重增加。分子筛和离子交换两步层析洗脱后可获得纯度具有免疫活性的S抗原，蛋白含量为5%-7%；电泳显示单一蛋白条带，分子量约为53,000。分离效果较好。2只实验组大鼠分别于免疫后第11、14天出现典型的眼内炎表现，1只未发病；对照组均未发病。证明所提纯的S抗原具有免疫活性。
结论 该实验方法能快速高效地提纯牛视网膜S抗原，可用于建立EAU疾病模型及其免疫治疗等相关研究。
|
|
|
| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
|
|
上一篇会议投稿： Vogt-小柳-原田氏病6例的临床诊断与治疗分析
下一篇会议投稿： 甲状腺相关眼病伴眼球突出的眶内容物体积测量 |
|
|
| 【字体：小 大】【发表评论】【加入收藏】【告诉好友】【打印此文】【关闭窗口】 |
|
网友评论：（只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）