|
| 转化生长因子－β在正常和糖尿病大鼠视网膜中基因表达的研究 |
|
作者：沈炜 柳林 文章来源：上海第二军医大学附属长海医院眼科 点击数： 更新时间：2005-6-17 16:01:25 
|
|
| 目的： 糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy, DR)的形成涉及多因素、多环节，确切机制至今尚未清楚。细胞生物学和分子生物学技术的发展及其跟临床的结合研究,加深了对DR的认识。本研究选择转化生长因子-1（Transforming growth factor-1,TGF-1）和转化生长因子-2（TGF-2）为对象，定量检测其在正常大鼠视网膜中的表达水平，探讨TGF-1和TGF-2在正常视网膜中表达的差异，为视网膜中基因的检测建立初步的技术平台；检测TGF-2在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的表达情况，观察和分析TGF-2的动态表达变化，探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。
方法： 1.选10周龄，雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠14只，分离正常大鼠视网膜，抽提RNA并逆转录。2.实时荧光PCR技术定量分析正常大鼠视网膜中TGF-1和TGF-2的mRNA含量。3.用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型，血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠。4.上述动物模型于第4、8、12、16、20、24周分别分离视网膜，放入液氮保存。5.应用RT-PCR技术检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。
结果： 1.制备大鼠视网膜这样微量组织中总RNA，实验结果显示制备的RNA样品完好无降解，能够用于基因表达分析。2.成功地建立了实时荧光定量PCR检测TGF-基因表达的技术平台，视网膜组织中的定量PCR的Base Line荧光值曲线，样品的3个复孔的实时荧光值曲线大部分拟合良好，Ct值接近，说明实验PCR反应体系稳定，模板分配均匀，结果可靠。3.成功地用STZ诱导建立了大鼠糖尿病模型。4.正常大鼠视网膜中TGF-2的mRNA转录丰度是TGF-1的55倍左右。TGF-2和TGF-1的比值为55.00±26.61，统计学上差异有显著性（P<0.01）。5.与正常对照组相比，糖尿病组大鼠视网膜中TGF-β2的mRNA表达于4周时升高，但统计学上差异无显著性（p=0.201）；8周时则下降，差异有显著性（p=0.041）；12周时仍下降，差异有显著性（p=0.029），较8周时已出现上升趋势；16周时与正常对照组无明显差异（p=0.361）；20周时则开始升高，但差异无显著性（p=0.136）；24周时继续升高，差异有显著性（p=0.047）。
结论： 1.实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析极少量组织细胞的基因表达，是一种很好的检测视网膜中基因表达量的定量方法。2.TGF-在正常视网膜中以TGF-2表达为主，提示可能是TGF-2在视网膜生理功能中起主导作用。3.TGF-β2的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第8周、12周时明显降低，第24周时明显升高，可以看出TGF-β2随时间变化呈双相性。一方面说明TGF-β作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控的特点，另一方面也说明TGF-β2在DR中可能发挥着重要作用。
|
|
|
| 会议投稿录入：doctordyan 责任编辑：毛进 |
|
|
上一篇会议投稿： 内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒联合地塞米松防治角膜移植排斥反应的实验研究
下一篇会议投稿： 白细胞介素1对角膜上皮细胞细胞因子分泌的影响 |
|
|
| 【字体：小 大】【发表评论】【加入收藏】【告诉好友】【打印此文】【关闭窗口】 |
|
网友评论：（只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）