目的　Long Evans大鼠视网膜干细胞的培养、鉴定及有效冻存。方法　以胎龄17 d Long Evans大鼠眼视网膜神经上皮细胞为来源，体外培养视网膜干细胞，通过免疫荧光方法对视网膜干细胞进行鉴定；并对培养后视网膜干细胞进行冻存，分批次于1周、2周、4周、8周、12周细胞复苏，测定活细胞比例，并观察血清诱导分化结果。结果　在bFGF 作用下,所培养细胞可形成悬浮生长的细胞克隆球,经多次传代,细胞增殖能力未见衰减。BrdU 标记结果显示悬浮细胞团主要是由分裂增殖的细胞组成。培养细胞可表达神经干细胞的特异性抗原Nestin 及胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10；在冻存后不同时间复苏的视网膜干细胞的成活比例分别为70%、67%、65%、62%、62%，再培养生长良好，经10%胎牛血清诱导可向成熟细胞分化, 免疫荧光检测结果提示视网膜干细胞可分为神经元、神经胶质细胞及感光细胞、双极细胞以及神经节细胞。结论　Long Evans大鼠眼视网膜神经上皮存在视网膜干细胞且培养方法可行，并且对视网膜干细胞成功地进行了冻存、复苏和再培养，为今后建立“人视网膜干细胞库”提供了方法学基础。