| 目的：从蛋白质水平探查晶状体囊膜下上皮细胞中糖皮质激素特异性受体蛋白存在的可能性，明确糖皮质激素影响晶状体代谢的作用模式；在此基础上，引入钙离子通道阻滞剂维拉帕米（Verapamil）探查糖皮质激素“脱钙效应”对晶状体代谢的影响，并与脂质过量化物(MDA)及谷胱甘肽(GSH)等致伤因素对比分析, 筛选糖皮质激素诱发晶状体代谢紊乱过程中的主导性因素。
方法：170只15日龄的孵化鸡胚随机分为4组：空白对照组（45只）；糖皮质激素实验组（45只, 地塞米松 0.025umol /per egg）；糖皮质激素联合维拉帕米实验组（40只, 地塞米松0.025umol +维拉帕米0.5mg /per egg）；糖皮质激素联合异柠檬酸钠实验组（40只, 地塞米松0.025umol +异柠檬酸钠0.25mmol /per egg）。施加药物后继续孵化，分别在加药后12，24和36，48小时4个时间点, 摘取四组孵化鸡胚晶状体及肝脏组织, 应用单克隆抗糖皮质激素受体特异抗体以及蛋白质免疫印迹法（Western-Blot），检测鸡胚肝脏和晶状体囊膜下上皮细胞中的糖皮质激素受体蛋白质的表达；同时以肝脏组织为对照，应用免疫组织化学法对鸡胚晶状体囊膜下可能存在的特异性受体蛋白的上皮细胞进行染色标记；应用数码裂隙灯生物显微镜（Nikon995 Coolpix）对晶状体混浊度进行拍照记录；同时以原子光谱分析技术对糖皮质激素诱发白内障过程中鸡胚晶状体组织、房水以及玻璃体中Ca2+、Mg2+、Fe2+变化进行检测，分析Verapamil作为Ca2+通道阻滞剂对晶状体及其周围环境中Ca2+、Mg2+、Fe2+代谢的影响；分别应用丙二醛（Malondialdehyde, MDA）、谷胱甘肽（Glutathione ,GSH）以及谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）标准试剂盒分析糖皮质激素诱发白内障过程中鸡胚晶状体、肝脏内 MDA、GSH、GSH-PX指标的动态变化曲线；并以原子光谱分析法对各组鸡胚晶状体钙含量的动态变化进行分析；应用双向凝胶电泳分析法对糖皮质激素对晶状体囊膜下上皮细胞蛋白质表达的影响。
结果：Western Blot分析单克隆鼠抗鸡抗糖皮质激素受体抗体在预期93kDa位置检测到鸡胚肝脏组织中特异性蛋白质的显著表达，而晶状体囊膜下上皮细胞则未能检测到93kDa蛋白质的表达；免疫组织化学法显示鸡胚肝脏组织可见广泛抗体阳性着染细胞，而晶状体囊膜下上皮细胞未发现抗体阳性着染细胞；糖皮质激素联合维拉帕米实验组鸡胚晶状体、房水及前段玻璃体中Ca2+、Mg2+、Fe2+含量的升高幅度均低于相同作用期的其他糖皮质激素实验组（P<0.05）；维拉帕米可以抑制糖皮质激素作用条件下晶状体以及玻璃体内Ca2+含量的升高（P<0.05）；数码裂隙灯拍照记录结果显示：糖皮质激素联合维拉帕米实验组的鸡胚晶状体混浊度低于糖皮质激素实验组（P<0.05）；对比正常空白对照组，三个实验组的鸡胚晶状体Ca2+、MDA含量均随时间呈现上升趋势，而GSH以及GSH-PX活力呈现降低趋势；同一时段糖皮质激素联合维拉帕米实验组鸡胚晶状体Ca2+、MDA含量的上升幅度均明显低于糖皮质激素联合柠檬酸钠实验组及单纯糖皮质激素实验组（P<0.05）；同时GSH、GSH-PX活力高于糖皮质激素联合柠檬酸钠实验组及糖皮质激素实验组（P<0.05）；三个实验组的鸡胚肝脏MDA含量均随时间呈现上升趋势，而GSH以及GSH-PX活力呈现降低趋势；同一时段糖皮质激素联合柠檬酸钠实验组鸡胚肝脏MDA含量的上升幅度均明显低于糖皮质激素联合维拉帕米实验组及单纯糖皮质激素实验组（P<0.05）；同时GSH、GSH-PX活力高于糖皮质激素联合维拉帕米实验组及糖皮质激素实验组（P<0.05）；数码裂隙灯拍照记录结果显示：糖皮质激素联合维拉帕米实验组鸡胚晶状体混浊度低于糖皮质激素联合柠檬酸钠实验组及糖皮质激素实验组（P<0.05）。双向凝胶电泳分析显示：通过多元非受体介质的介导作用， 糖皮质激素对晶状体代谢最为活跃的囊膜下上皮细胞蛋白质表达存在着间接的、非受体模式的作用。
结论：糖皮质激素是通过一个间接的、非“激素-受体”作用模式影响晶状体的代谢； Ca2+是参与糖皮质激素诱发鸡胚晶状体代谢紊乱的重要作用介质；玻璃体内Ca2+含量的升高可能与晶状体后囊下混浊的形态学特征相关；在糖皮质激素影响晶状体代谢的多元作用介质中，Ca2+是导致代谢紊乱的主导性致伤介质。
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