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| 转化生长因子－β在正常和糖尿病大鼠视网膜中基因表达的研究 |
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作者：沈炜 柳林 文章来源：第二军医大学第一附属医院眼科 点击数： 更新时间：2005-7-11 15:34:34 
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| 目的： 糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy, DR)的形成涉及多因素、多环节，确切机制至今尚未清楚。细胞生物学和分子生物学技术的发展及其跟临床的结合研究,加深了对DR的认识。本研究选择转化生长因子-1（Transforming growth factor-1,TGF-1）和转化生长因子-2（TGF-2）为对象，定量检测其在正常大鼠视网膜中的表达水平，探讨TGF-1和TGF-2在正常视网膜中表达的差异，为视网膜中基因的检测建立初步的技术平台；检测TGF-2在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的表达情况，观察和分析TGF-2的动态表达变化，探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制。
方法： 1.选10周龄，雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠14只，分离正常大鼠视网膜，抽提RNA并逆转录。2.实时荧光PCR技术定量分析正常大鼠视网膜中TGF-1和TGF-2的mRNA含量。3.用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型，血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠。4.上述动物模型于第4、8、12、16、20、24周分别分离视网膜，放入液氮保存。5.应用RT-PCR技术检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达。
结果： 1.制备大鼠视网膜这样微量组织中总RNA，实验结果显示制备的RNA样品完好无降解，能够用于基因表达分析。2.成功地建立了实时荧光定量PCR检测TGF-基因表达的技术平台，视网膜组织中的定量PCR的Base Line荧光值曲线，样品的3个复孔的实时荧光值曲线大部分拟合良好，Ct值接近，说明实验PCR反应体系稳定，模板分配均匀，结果可靠。3.成功地用STZ诱导建立了大鼠糖尿病模型。4.正常大鼠视网膜中TGF-2的mRNA转录丰度是TGF-1的55倍左右。TGF-2和TGF-1的比值为55.00±26.61，统计学上差异有显著性（P<0.01）。5.与正常对照组相比，糖尿病组大鼠视网膜中TGF-β2的mRNA表达于4周时升高，但统计学上差异无显著性（p=0.201）；8周时则下降，差异有显著性（p=0.041）；12周时仍下降，差异有显著性（p=0.029），较8周时已出现上升趋势；16周时与正常对照组无明显差异（p=0.361）；20周时则开始升高，但差异无显著性（p=0.136）；24周时继续升高，差异有显著性（p=0.047）。
结论： 1.实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析极少量组织细胞的基因表达，是一种很好的检测视网膜中基因表达量的定量方法。2.TGF-在正常视网膜中以TGF-2表达为主，提示可能是TGF-2在视网膜生理功能中起主导作用。3.TGF-β2的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第8周、12周时明显降低，第24周时明显升高，可以看出TGF-β2随时间变化呈双相性。一方面说明TGF-β作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控的特点，另一方面也说明TGF-β2在DR中可能发挥着重要作用。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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