目的:研究近紫外光(UVA)激发下TiO2基纳米光催化剂薄膜对体外培养的牛晶状体上皮细胞(LEC)的杀伤效应,并观察该薄膜引起的牛LEC的凋亡和坏死现象,从而初步探讨细胞死亡的机制。
方法:采用溶胶—凝胶法制备修饰有TiO2基纳米光催化剂薄膜的玻片。体外培养牛LEC并爬片生长于此玻片上。设未经TiO2基纳米光催化剂薄膜修饰的玻片作为对照。用波长为365nm(UVA)的紫外光分组激发玻片0-40min。(平均光照强度:0.185 mw/cm2)。倒置显微镜下观察经激发后3h和24h的细胞在薄膜上的生长状况。用MTT比色法测定不同照射时间,TiO2基纳米光催化剂薄膜对牛LEC杀伤作用的时效关系。用HE染色,吖啶橙-溴化乙啶(AO-EB)染色等组织学染色方法观察牛LEC的凋亡和坏死现象,并分组比较。
结果:经UVA激活的TiO2基纳米光催化剂薄膜对牛LEC有明显的杀伤作用。倒置显微镜下可见照射20min以上组细胞表面有大量泡状突起,大部分细胞收缩变圆。对照组细胞未见明显改变。实验组细胞存活率分别为:10min,88.41%;20min,62.50%;30min,47.50%;40min,7.25%,对照组细胞存活率:10min,91.67%;20min,70.29%;30min,55.80%;40min,31.67%。两组细胞存活率有明显差异(p=0.000),且随照射时间延长,TiO2基纳米光催化剂薄膜对牛LEC的杀伤效应更加显著。HE染色法实验组照射20min以上,细胞收缩变圆,细胞间隙增大,核固缩明显,未见核仁,部分胞膜破裂,细胞崩解为碎片。对照组细胞形态大致正常。AO-EB染色法发现大量坏死的牛LEC,照射时间较短时,可见部分LEC凋亡现象。其凋亡率(19.15%,p=0.012)和坏死率(92.11%,p=0.000)明显高于对照组(凋亡率,4.00%;坏死率,56.88%)。
结论:经UVA激活的TiO2基纳米光催化剂薄膜对牛LEC有明显杀伤作用。通过对LEC的组织学观察,可推断细胞死亡的机制主要和坏死有关,是TiO2受UVA照射后在细胞膜表面产生的氧化还原反应造成的;TiO2基纳米光催化剂薄膜可能在人工晶体修饰及后发性白内障防治方面提供新的探索途径。
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