| 目的 应用双向电泳和质谱分析技术分离和鉴定小鼠晶状体蛋白质组的特性。方法 提取5周龄的小鼠晶状体总蛋白，进行固相pH梯度（IPG）等电聚焦双向电泳，胶体考马斯亮蓝R-250染色，使用PDQuest 7.30图像分析软件分析电泳图像。选择主要蛋白点胶上酶解，应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间（MALDI-TOF/TOF）仪器进行串联质谱（MS/MS）鉴定及分析。结果 高上样量和12％分离胶能够较好地分离晶状体低丰度蛋白；低上样量和12.5％浓度分离胶可很好地分离高丰度蛋白——晶状体蛋白。上样量为882μg和190μg时，分别检测370±41蛋白点（n=3）和57±5个蛋白点（n=3），平均匹配率分别为81.3％和92.5％。不同胶间蛋白质斑点的位置偏差在IEF 方向（横向）平均为（0.92 ± 0.15）mm，在SDS-PAGE 方向（纵向）平均为（1.28 ± 0.21mm）。质谱鉴定得到16种高丰度晶状体蛋白质（晶状体蛋白），并鉴定1种低丰度蛋白念珠状纤维结构蛋白。结论 双向电泳和质谱鉴定可有效分离和分析晶状体总蛋白质，不同的上样量可以分离不同丰度晶状体蛋白质。为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径。 |
