目的:体外培养并鉴定人类视网膜微血管内皮细胞(HRCECs),并探讨Norrin基因高表达后对HRCECs增殖和细胞周期的影响。方法:体外分离、培养并鉴定人类视网膜微血管内皮细胞,抗第Ⅷ因子相关抗原抗体及透射电镜观察W-P小体鉴定细胞。利用脂质体Lipofectimine 2000将AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染HRCECs,RT-PCR、免疫组化和Western-Blot方法检测Norrin/myc的表达确定转染效率。采用MTT法测定转染后细胞的增殖能力,流式细胞术分析其细胞周期变化。结果:所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性,透射电镜下见特征性的W-P小体。AP-3myc-hNorrin/pRK5质粒转染后24小时,RT-PCR显示质粒转染组Norrin表达水平较阴性对照组升高,P值为0.009。转染后48小时免疫组化及Western-Blot均显示质粒转染组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTT法显示细胞增殖较对照组高,细胞周期检测示质粒转染组G2期细胞较阴性对照组高,P值均为 0.001。结论:脂质体能成功转染AP-3myc-hNorrin/pRK5进入HRCECs。Norrin高表达能促进人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs) 的增殖、并促进细胞DNA合成,使细胞周期由G0期向G2期。提示Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。
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