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枸杞多糖对晶状体上皮凋亡及其线粒体跨膜电位影响的实验研究
作者:汪朝阳 赵…  文章来源:温州医学院附属眼视光医院 325027  点击数1784  更新时间:2004/5/27  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的:探讨中药单体枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides, LBP)对氧化损伤诱导的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells ,LECs)凋亡及其线粒体跨膜电位(Mitochondrial Transmembrane Potential,ΔΨm)的影响。从细胞质途径在细胞和分子生物学水平探讨LBP抑制LECs凋亡的作用及其机制。 方法:牛LECs进行原代及传代培养,取2-5代的培养细胞,实验共分3组,空白对照组:正常LECs+DMEM培养液,H2O2组:空白组+3% H2O2(终浓度为200μmol/L),LBP组:H2O2组+LBP(终浓度为1g/L)。培养的LECs在CO2培养箱中孵育24h后应用透射电子显微镜察该LECs超微结构的改变,流式细胞仪(FCM)观察各实验组LECs的DNA含量及其ΔΨm改变。 结果:H2O2组在电子显微镜下可观察到细胞核染色质凝集、固缩,边集、核碎裂等,呈现典型的细胞凋亡的形态学改变;FCM检测可见典型的凋亡亚G1峰,提示细胞核内DNA含量下降,LECs的凋亡峰百分率(44.90±1.93)%与正常对照组(0.90±1.21)%有非常显著差异(p < 0.01);线粒体ΔΨm下降,ΔΨm改变的细胞数高达(66.39±8.84)%,与正常对照组(0.51±0.18)有显著性差异(P< 0.01)。LBP组电镜下LEC形态改变轻微,表现为部分线粒体水肿,脂滴多少不等,细胞间隙增宽。部分细胞发生不同阶段的凋亡改变,大多为凋亡早期改变,呈胞核内染色质密度增高,线粒体水肿、嵴断裂减少;FCM检测LECs的凋亡峰百分率%(12.85±1.58)%与H2O2组(44.90±1.93)%有非常显著差异(p < 0.01);线粒体ΔΨm轻微降低,下降的细胞数占(41.73±7.75)%,与H2O2组有非常显著差异(P< 0.01)。 结论:LECs线粒体ΔΨm下降是氧化诱导LECs凋亡过程中发生的早期事件和凋亡发生的通路之一;通过抑制细胞内重要的细胞器线粒体ΔΨm的下降可能是LBP抑制LECs凋亡的机制之一。
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