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枸杞多糖对晶状体上皮细胞凋亡及其线粒体跨膜电位影响的实验研究
作者:汪朝阳 赵…  文章来源:温州医学院附属眼视光医院 325027  点击数1754  更新时间:2004/5/27  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的:探讨中药单体枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides, LBP)对氧化损伤诱导的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells ,LECs)凋亡及其线粒体跨膜电位(Mitochondrial Transmembrane Potential,ΔΨm)的影响。从细胞质途径在细胞和分子生物学水平探讨LBP抑制LECs凋亡的作用及其机制。 方法:牛LECs进行原代及传代培养,取2-5代的培养细胞,实验共分3组,空白对照组:正常LECs+DMEM培养液,H2O2组:空白组+3% H2O2(终浓度为200μmol/L),LBP组:H2O2组+LBP(终浓度为1g/L)。培养的LECs在CO2培养箱中孵育24h后应用透射电子显微镜察该LECs超微结构的改变,流式细胞仪(FCM)观察各实验组LECs的DNA含量及其ΔΨm改变。 结果:H2O2组在电子显微镜下可观察到细胞核染色质凝集、固缩,边集、核碎裂等,呈现典型的细胞凋亡的形态学改变;FCM检测可见典型的凋亡亚G1峰,提示细胞核内DNA含量下降,LECs的凋亡峰百分率(44.90±1.93)%与正常对照组(0.90±1.21)%有非常显著差异(p < 0.01);线粒体ΔΨm下降,ΔΨm改变的细胞数高达(66.39±8.84)%,与正常对照组(0.51±0.18)有显著性差异(P< 0.01)。LBP组电镜下LEC形态改变轻微,表现为部分线粒体水肿,脂滴多少不等,细胞间隙增宽。部分细胞发生不同阶段的凋亡改变,大多为凋亡早期改变,呈胞核内染色质密度增高,线粒体水肿、嵴断裂减少;FCM检测LECs的凋亡峰百分率%(12.85±1.58)%与H2O2组(44.90±1.93)%有非常显著差异(p < 0.01);线粒体ΔΨm轻微降低,下降的细胞数占(41.73±7.75)%,与H2O2组有非常显著差异(P< 0.01)。 结论:LECs线粒体ΔΨm下降是氧化诱导LECs凋亡过程中发生的早期事件和凋亡发生的通路之一;通过抑制细胞内重要的细胞器线粒体ΔΨm的下降可能是LBP抑制LECs凋亡的机制之一。
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