| 【目的】
探讨体外培养的人角膜内皮细胞中生长因子及生长因子受体mRNA表达，筛选可能对体外培养的人角膜内皮细胞生长有调控作用的生长因子。
【材料与方法】
1.研究材料：体外培养，生长良好的2－4代人角膜内皮细胞8株。
2.引物设计：查阅参考文献或Genebank有关基因序列，用clonemanager软件设计列生长因子及生长因子受体的引物：aFGF、bFGF、EGF、NGF、TGF－β、VEGF、KGF、IGF、PDGF、PDEF、HGF以及内参照β－actin引物由试剂盒提供。
3.RNA：提取及cDNA合成使用Invetrogen公司的Purelink和SuperScript Ⅲ试剂盒二步法提取合成。
4.PCR：使用Invetrogen公司Platium PCR SuperMix试剂盒，梯度PCR仪。
5.凝胶电泳和成像：1.2%琼脂糖凝胶，GoldenView显色剂，100bp leader Marker，电压130V，时间50分钟，使用凝胶成像系统成像。
6.PCR产物测序：英韦创津公司。
【结果】
1.体外培养的人角膜内皮细胞表达的下列生长因子的mRNA：bFGF、EGF、NGF、VEGF、TGF－β1、TGF－β2、TGF－β3、PEGFA、KGF2、PDEF、IGF2。
2.体外培养的人角膜内皮细胞表达的下列生长因子受体的mRNA：bFGFR1、bFGFR2、EGFR、NGFR、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、TGF－βR1、TGF－βR2、TGF－βR3、KGFR、IGFR1。
【结论】
体外培养的人角膜内皮细胞表达多种生长因子和生长因子受体的mRNA。提示人角膜内皮也可能表达相应的蛋白，因此可受到来自邻近的其它细胞和房水的生长因子的调控。并且角膜内皮细胞自身也自分泌多种细胞生长因子进行自我调控。
本研究受：
卫生部临床重点项目
985项目二期
广东省自然科学基金资助
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