目的:研究不同波长光照射对人胚视网膜色素上皮细胞形态、功能及分泌HGF的影响,试从细胞生物学水平和分子生物学水平探讨近视眼的发病机制。
方法:将第4-5代细胞以每孔3×104的密度接种于4个12孔板,培养三天后,将培养液换为无血清的F12培养液,置于不同波长光下培养,分别于12、24、48、72h后收集培养液,标本检测前储存于-20℃备用,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),测定HGF的量,将置于红色、蓝色、白色光下照射24小时后的细胞及对照组细胞取出,并用RT-PCR法检测不同波长光照射后RPE细胞HGF的mRNA表达水平,从而分析体外培养的RPE细胞在光信号传导中的作用。
结果: ELISA结果显示人胚RPE细胞可分泌HGF,在受到不同波长的光照射后,不同时间HGF的分泌量也不一样, 随着时间变化,四组HGF的含量均升高,但光照组与对照组相比,升高的幅度低,红光与蓝光更为明显。而蓝光最低。数据采用两因素方差分析,结果有统计学意义,RT-PCR结果显示不同波长光照射后RPE细胞HGF的mRNA表达水平不同,蓝光下培养的RPE细胞HGF的mRNA表达量最少,结果采用单因素方差分析,结果有统计学意义。
结论:通过本课题的研究,初步明确了不同波长光可使RPE细胞合成HGF功能受阻,为进一步阐明近视眼的发病机制奠定了基础。
|