目的:建立一种局部使用防腐剂滴眼液制作兔干眼模型的方法,并研究其角膜电生理特性的改变。
方法:随机选取一眼为实验眼滴用0.1%洁尔灭滴眼液,对侧眼为空白对照组。分别于给药前及给药后第3、5、7、14天行双眼Schirmer 试验、1%荧光素钠染色(FL)、1%虎红染色(RB),给药前及给药后第7、14天行结膜细胞印迹学检查及PAS染色。用药后第14天收集泪液并取结膜行western-blot半定量检测MUC5AC蛋白在泪液及结膜中含量,取结膜及角膜行石蜡切片检查、扫描及透射电镜检查,使用短路电流技术检测角膜电生理参数及ATP引起的角膜氯离子分泌反应(n=8)。
结果:给药前,实验组及对照组各项检查无显著差异。给药后第7天起实验组Schirmer 试验值减少(p<0.001)并逐渐下降;第5天起FL染色计分增加(p<0.001)并逐渐上升;第3天起RB染色计分增加(p<0.001)并逐渐上升;泪液及结膜MUC5AC含量减少;光镜、电镜检查均发现结膜、角膜结构异常。短路电流检测发现实验组角膜跨膜电压、跨膜基础电流减少及ATP引起氯离子分泌明显减少(p<0.001),但电阻无显著差异(p>0.05)。
结论:局部应用洁尔灭滴眼液构建的兔干眼模型符合人类干眼病发病过程及临床表现,可作为研究干眼发病机制和病理表现的理想模型。该模型角膜电生理特性的变化反映了功能损害,ATP引起的氯离子分泌的明显减少提示在ATP受体水平或信号传导通路上可能存在缺陷,在电生理方面进一步揭示了洁尔灭造成角膜损害的机制及干眼的发病机制,修复这些缺陷可作为干眼治疗的一个新途径。
*本课题受:国家高技术研究发展计划(863计划)(2003AA205050);国家“十五”科技攻关计划:化学性眼表损伤机制及眼表重建的研究(3030901002005);教育部博士点基金(20030558074)基金的资助。
* 通讯作者:王智崇(中山大学中山眼科中心 510060 广州)
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