| 目的： 本研究旨在于健康S-D大鼠玻璃体腔注射一定量的外源性晚期糖基化终末产物（AGEs），观察AGEs对视网膜神经成份的损伤作用。
材料与方法： 1、AGE-BSA的制备：牛血清白蛋白（BSA）、D-葡萄糖及苯甲基磺酰氟（PMSF）共同溶解于0.2mol/L磷酸缓冲液中37℃培养箱内孵化60天。非糖基化BSA的制备：除不加葡萄糖外，其他材料及方法均同上。2、36只大鼠的右眼玻璃体腔注射0.25μg AGE-BSA做为实验组，左眼玻璃体腔注射同样剂量的非糖基化BSA做为对照组。1只正常大鼠做为胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的正常对照。3、分别在玻璃体腔注射后第3、5、7天处死S-D大鼠，行视网膜铺片TUNEL法观察神经节细胞凋亡；在玻璃体腔注射后第1、3、5、7、10、14天处死S-D大鼠，行冰冻切片GFAP免疫组化观察Müller细胞胶质化反应情况、HE染色光镜下视网膜形态学观察及透射电镜下视网膜超微结构观察。4、实验组在玻璃体腔注射AGE-BSA后第14天，随机选取3眼行眼底荧光血管造影（FFA）。
结果： 1、AGE-BSA的成功孵育：形成质地粘稠的棕色液体；紫外荧光分光光度计检测其激发光波长峰值为373nm，发射光波长峰值为440nm，符合AGEs特征性荧光光谱；SDS-PAGE电泳显示AGE-BSA在含7.5%分离胶中与BSA泳带位置不同，且其分子量比BSA大。2、微分干涉显微镜下细胞凋亡的观察结果：对照组视网膜神经节细胞层未见凋亡细胞。实验组玻璃体腔注射AGE-BSA后第3天视网膜神经节细胞层未见凋亡细胞，第5、7天视网膜神经节细胞层见凋亡的神经节细胞散在分布，其数量与对照组有统计学差别（P<0.01）。3、激光扫描共聚焦显微镜下视网膜GFAP的表达情况：正常及对照组S-D大鼠视网膜仅见内界膜及神经纤维层少量GFAP表达，其余各层未见阳性表达；实验组玻璃体腔注射AGE-BSA后第1天视网膜GFAP表达与对照组结果相似，第3天起见视网膜GFAP表达明显增加，随AGE-BSA作用时间的延长，视网膜GFAP表达的量逐渐增多，GFAP呈丝状由内层逐渐向外层纵向延伸，第10天时表达的GFAP由内界膜横跨至外界膜，至第14天时 GFAP表达有所减少。4、两组S-D大鼠视网膜组织冰冻切片HE染色均未见明显形态学异常。5、透射电镜观察：对照组视网膜未见异常，实验组发现有凋亡的神经节细胞，实验组Müller细胞见有较多线粒体空泡化、嵴断裂、粗面内质网扩张、游离核糖体明显增多等超微结构异常改变。6、S-D大鼠玻璃体腔注射AGE-BSA后第14天FFA检查未见视网膜血管渗漏、微血管瘤形成等异常改变。
结论： 1、一定浓度的AGEs可诱导健康S-D大鼠视网膜神经节细胞发生凋亡。 2、一定浓度的AGEs可造成健康S-D大鼠视网膜Müller细胞损伤；可诱导其GFAP表达增加，并且随作用时间的延长表达渐增强，提示Müller细胞在AGEs作用下发生反应性胶质化改变。
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