| 目的：我们前期工作发现给予特定的微环境，表皮干细胞在体外可以分化为结、角膜上皮样细胞。鉴于此，通过构建猴-鼠嵌合体模型，进一步研究表皮干细胞在体内胚胎微环境中是否具有多向分化的潜能，从而为成体干细胞可塑性研究提供良好的工具。
方法：分离培养雄性恒河猴表皮干细胞，通过免疫组化和RT-PCR检测K15、α1、β6、K19等分子标志进行鉴定；选取消化后直径为12～15um小、圆的细胞，通过显微注射技术注射到BALB/C小鼠3.5天的囊胚， 每胚注射6～8个细胞，然后移植到见栓2.5天的BALB/C假孕母鼠右侧子宫，每只母鼠移植8～12个注射胚；分别取移植后E6.5、E11.5、E17.5、P1的胚胎和胎鼠，提取E6.5、E11.5整个胚胎和E17.5及P1胎鼠皮肤、肝脏、血细胞、角膜、视网膜组织的DNA；合成恒河猴Y染色体性别决定基因SRY的引物进行扩增，检测恒河猴细胞在嵌合体小鼠各组织中分布情况。
结果：通过差异黏附法分选得到10％左右的表皮干细胞，呈K15、α1、β6、K19阳性；分别在E6.5、E11.5中检测到恒河猴特异性SRY基因；在E17.5和P1胎鼠的外胚层的皮肤、角膜、视网膜中检测到SRY基因，在肝脏细胞中也可检测到SRY基因。
结论：表皮干细胞显微注射入囊胚后可以存活、扩增并参与胚胎的发育，表明表皮干细胞在特定的囊胚的微环境中具有发育的可塑性，其可以为再生医学提供种子细胞的来源；利用显微注射构建异种嵌合体模型是研究成体干细胞有用的工具。
本课题受国家“十五”科技攻关计划项目（ 2004BA720A15 ）、国家高技术研究发展计划（ 863 计划）（2003AA205005）、国家自然科学基金（30500555）、广东省科技计划项目(组织工程重大专项) （A302020101）、广东省科技计划项目（2003A3020401）资助
通讯作者：葛坚, jiange@gzsums.edu.cn |
