| 目的 探讨P370L突变型Myocilin对人小梁细胞内质网应激反应的调控作用，初步揭示P370L突变型Myocilin的细胞损伤机制。方法 应用定点突变技术构建P370L突变型Myocilin基因真核表达载体，阳离子脂质体体外瞬时转染空载体、野生型及突变型Myocilin载体； RT-PCR及Western blot检测转染各组人小梁细胞内质网应激反应效应因子GRP78、 XBP1及 Phospho-eIF2a的mRNA及蛋白质表达；倒置相差显微镜、透射电镜及共聚焦显微镜观察细胞结构改变及细胞粘附能力。结果 P370L突变型Myocilin基因真核表达载体成功构建并高效体外转染人小梁细胞；P370L突变型Myocilin下调人小梁细胞GRP78及Phospho-eIF2α蛋白表达，同时上调XBP1mRNA及蛋白质表达，引起人小梁细胞结构异常，线粒体嵴断裂、线粒体肿胀、粗面内质网扩张、细胞粘附性降低以及细胞死亡；而野生型Myocilin对人小梁细胞内质网应激反应及细胞性状无明显影响。结论： P370L突变型Myocilin因错误折叠，构象改变而获得病理性调控功能，破坏人小梁细胞内质网应激反应及内质网功能，扰乱蛋白质合成及分泌，导致细胞损伤。
通讯作者：葛坚, jiange@gzsums.edu.cn |
