目的 观察H2O2对人晶状体上皮细胞的小窝蛋白(caveolin)及磷酸化caveolin-1分布与表达的影响,评估caveolin及caveolin-1的磷酸化可能参与细胞内信号转导的过程。 方法 给予人晶状体上皮细胞(SRA01/04)不同浓度及不同时间点的H2O2刺激。用激光共聚焦显微镜和免疫荧光显微镜观察caveolin及磷酸化caveolin-1的分布。通过western blot免疫印迹试验观察caveolin表达水平的变化以及磷酸化caveolin-1的表达。用SPSS12.0统计学软件包进行数据处理分析。 结果 通过激光共聚焦显微镜和荧光显微镜,观察到人晶状体上皮细胞的质膜和细胞浆内含有丰富的caveolin;当给予细胞H2O2.刺激后,细胞浆内caveolin的分布增多;当刺激时间达到一个小时后,细胞膜被破坏,但仍可观察到caveolin的分布情况。此外,H2O2.的刺激可以使caveolin-1发生磷酸化,磷酸化的caveolin-1主要分布于细胞的局部粘着部位。western blot免疫印迹试验发现,随着H2O2作用时间的延长和刺激浓度的升高,细胞质膜和细胞总蛋白质的caveolin表达水平呈下调趋势。 结论 由于过氧化氢的损伤是白内障形成的一个重要致病机制,H2O2.刺激人晶状体上皮细胞后,可能通过调节caveolin的重新分布或破坏了小窝(caveolae)的结构,使其参与细胞的信号转导等过程而参与了白内障的形成,具体机制仍有待于进一步研究。 caveolae和caveolin可能在人晶状体上皮细胞中有重要作用。 |