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siRNA-PKCα对人眼球筋膜囊成纤维细胞细胞因子表达的影响
作者:马萍 高前…  文章来源:中山大学中山眼科中心  眼科学国家重点实验室 广州 510060  点击数1322  更新时间:2006/6/30 17:25:09  文章录入:sea_liu  责任编辑:毛进

[摘要]目的:观察体外培养的人眼球筋膜囊成纤维(HTF)细胞中PKCα下调表达时,MMP2、3、9,TGFβ1、2、3,CTGF、VEGF及bFGF的变化。方法:采用组织块培养法,进行成纤维细胞的体外培养。设计、合成靶向PKCα基因的siRNAs,并进行筛选得到具有高效干扰效率的siRNA。将不同浓度的siRNA-PKCα(20nM 、50 nM 、100 nM 、200 nM)分别作用于HTF细胞,得到最佳转然浓度。最后,检测siRNA-PKCα优化转染前后部分细胞因子的变化情况。结果:经筛选获得一条较为高效的siRNA ,其浓度为100 nM 时,对HTF细胞增殖的抑制效率基本达到饱和,为39.19%。RT-PCR检测结果示:靶向RNA干扰抑制PKCα后,MMP2、MMP3、TGFβ1、TGFβ2以及CTGF的表达均受到抑制,MMP9、TGFβ3、bFGF的表达无明显改变。结论:siRNA-PKCα除了通过下调PKCα信号通路调节HTF细胞周期外,还可以抑制MMP2、MMP3、TGFβ1、TGFβ2、CTGF的表达,从而可能影响HTF细胞的增殖移行、胶原的合成以及新生血管的生成,在青光眼滤过区瘢痕化信号调控中发挥一定作用。

本课题受:国家自然科学基金(30200306)资助

* 通讯作者:余克明(中山大学中山眼科中心,广州,510060)

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