目的 观察HTLV-1病毒Tax蛋白对Müller细胞生长的影响及寻找Tax蛋白的结合和/或效应靶蛋白分子。
方法 重组质粒pc-Tax质粒转染Müller细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活力;流式细胞仪分析Müller细胞周期变化;细胞免疫化学(光镜及激光共聚焦显微镜观察)及免疫印迹法检测Müller细胞内Tax蛋白的表达。利用蛋白-蛋白反应,以差异蛋白质组学方法和生物信息学对细胞外GST-Tax融合蛋白和Müller细胞提取蛋白结合蛋白进行分析,经与对照样本比较,分离鉴定出候选靶蛋白分子并进一步验证。
结果 重组质粒pc-Tax转染Müller细胞后,细胞生长活力较对照组受抑制;细胞周期分析见S期增多,G2期减少;免疫染色见细胞中有Tax蛋白表达,呈阳性棕色反应(DAB染色)或绿色荧光(荧光染色),表达仅位于Müller细胞胞浆内;比较蛋白质组学分析找到10个差异蛋白质,为Tax候选靶蛋白,并初步证实Tax蛋白能与ENO1相结合。
结论 HTLV-1病毒Tax蛋白在Müller细胞中的表达能抑制细胞生长,可能通过多个靶分子发挥作用 |