| 目的 观察吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对脂多糖诱发人角膜基质细胞核因子一k B核转位及释放细胞因子的影响，初步评价吡咯烷二硫代氨基甲酸酯干预作用和机制。方法 原代培养人眼角膜基质细胞（Human corneal fibroblasts, HCFs），将HCFs随机分为DMEM对照组、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激组和二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate ，PDTC)预处理组。PDTC预处理组先加PDTC培养30分钟，然后同条件培养。分别在LPS刺激后1h,2h,4h,8h，Western blot检测HCFs NF- B的活化表达，酶联免疫吸附实验（Enzyme Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）检测HCFs 分泌白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）和IL-8蛋白的情况；逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）检测HCFs IL-6和IL-8 mRNA 的表达。结果 与DMEM对照组比较，单纯LPS组于LPS刺激后，细胞核NF- Bp65的含量较PDTC预处理组明显升高。与DMEM对照组比较，LPS刺激后，培养上清液中IL-6和IL-8蛋白的含量均显著升高。预先用PDTC处理后再给予LPS刺激的HCFs分泌IL-6和IL-8蛋白的含量及其mRNA的表达出现不同程度的降低，显著低于同时间段单纯LPS组HCFs的表达。结论 绿脓杆菌LPS可引起HCFs NF- B的核移位，活化的NF-κB与相关基因的启动子或增强子区结合以促进这些依赖NF-κB的细胞因子基因转录，PDTC可抑制LPS诱导的HCFsNF-κB的核转位，抑制NF- B的激活，从而下调HCFs相应细胞因子的表达。 |
