| 目的 分离培养胚胎及婴儿视网膜神经上皮层中的视网膜前体细胞，并进行体外培养和扩增，观察其增殖能力和自我更新能力。 方法 选取5-7月引产胚胎眼球，分离视网膜睫状体部以外的神经上皮层组织，将其消化分散成单个细胞后，进行视网膜前体细胞的选择性培养。观察原代和传代细胞的生长及检查细胞对Hoechst和BrdU的摄入情况，同时以免疫荧光细胞化学染色方法判断增殖细胞内Nestin的表达。通过免疫细胞化学染色方法检测分化后细胞内蛋白的表达。 结果 原代培养细胞中一部分细胞聚集，并在培养液中悬浮，经过传代后，多数细胞死亡；另有一部分细胞分裂增殖，形成致密的球状细胞团，轻轻晃动培养瓶，可从培养瓶壁上脱落，悬浮于培养液中。这种致密的细胞团在形态上与神经干细胞所形成的神经球（neurosphere）一致。消化分散后可形成新的子代细胞团。这种细胞能够吸收荧光染料Hoechst，在荧光显微镜下可观察到这些细胞团有明亮的蓝色荧光，继续培养，这些细胞团体积增大。同样免疫荧光化学检测表明这些细胞能吸收BrdU，表现出红色荧光，并且表达神经干细胞标志蛋白Nestin。在含有FBS的培养液中3-10天，这些细胞可分化为不同形态的终末细胞，并表达神经元、神经胶质细胞、各分化成熟的视网膜细胞的标志性蛋白。 结论 从5~7月胚胎视网膜神经上皮层中可分离培养出视网膜前体细胞，这种细胞具备增殖能力和自我更新能力，并具有多向分化能力。 |
