| 目的 本研究通过体内实验观察糖尿病早期大鼠视网膜小胶质细胞的活化特征及视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell ，RGC）损害，了解小胶质细胞参与神经元损害的过程。方法 体重为250－300g的成年雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠共20只，随机抽取10只大鼠采用链脲佐菌霉素（streptozotocin , STZ）腹腔注射方法制作糖尿病动物模型，根据糖尿病成模时间将大鼠随机分为糖尿病1月组及糖尿病3月组，每组各5只。10只大鼠做为相应对照组，每组各5只。取标本前1月使用脂溶性碳氰染料DiI（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethy lindocarbocyanine perchlorate）对全部实验组及对照组大鼠行上丘定位注射逆行标记RGC细胞。取大鼠眼球制备视网膜铺片和冰冻切片，采用免疫组化方法分别标记视网膜铺片、冰冻切片小胶质细胞和RGC。在共聚焦显微镜下采集照片。观察小胶质细胞细胞形态，分布特征，发生吞噬的细胞分布位置。计数并计算视网膜铺片RGC层小胶质细胞密度，发生吞噬的小胶质细胞密度, 冰冻切片视网膜各层小胶质细胞数及RGC个数。结果 糖尿病组视网膜铺片小胶质细胞胞体增粗，局部呈卵圆形隆起，分支减少，形态更加不规则，胞体包绕RGC。对各组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度进行组间比较发现：与对照组相比糖尿病大鼠1月组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度无显著性差异（P﹥0.05）；与对照组相比糖尿病大鼠3月组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度显著增加（P﹤0.01）；糖尿病大鼠3月组与糖尿病大鼠1月组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度无显著性差异（P﹥0.05）。对各组RGC层小胶质细胞平均密度进行比较发现：与对照组相比糖尿病大鼠1月组及3月组RGC层小胶质细胞平均密度均显著增加（P﹤0.05）；糖尿病大鼠3月组RGC层小胶质细胞平均密度较糖尿病大鼠1月组有显著增加（P﹤0.0001）。对各组小胶质细胞在视网膜各层的分布进行分析发现：与对照组相比糖尿病大鼠1月组A层和B层小胶质细胞数量显著增加（P﹤0.05）；糖尿病大鼠3月组与糖尿病大鼠1月组相比D层小胶质细胞数量显著增加（P﹤0.05）；糖尿病大鼠3月组A层小胶质细胞和D层小胶质细胞数量较对照组显著增加（P﹤0.001，P﹤0.05）。冰冻切片RGC计数显示：与对照组相比糖尿病大鼠1月组及3月组RGC数均显著减少（P﹤0.05，P﹤0.001）；糖尿病大鼠3月组RGC数较糖尿病大鼠1月组显著减少（P﹤0.05）。糖尿病早期小胶质细胞与RGC数量之间存在相关关系（P＜0.05）。结论 糖尿病早期小胶质细胞活化与神经节细胞损伤关系密切。1）糖尿病早期RGC层小胶质细胞即发生显著活化，表现为数量显著增加，形态改变，吞噬活跃。2）视网膜小胶质细胞活化反应主要表现在数量的显著增加，其吞噬活动可能并未随着RGC数量的显著减少而明显增强。3）糖尿病早期视网膜外层小胶质细胞数量增加以及吞噬RGC的小胶质细胞出现在IPL、OPL，表明小胶质细胞由RGC层向视网膜外层迁移。
|
