目的:1、建立慢性高眼压条件下兔视网膜组织差异表达基因的消减cDNA文库并鉴定,克隆和筛选与慢性高眼压视网膜损害相关的基因表达片段。2、采用35,000点的高密度Oligo基因芯片研究慢性高眼压影响下视网膜基因表达改变情况。
方法:使用抑制性消减杂交和35000点基因表达芯片,了解高眼压对兔、和大鼠视网膜和视神经基因表达的影响。向前房注射1%甲基纤维素每周1次,连续5周,制作兔眼慢性高眼压模型。提取实验组和对照组兔视网膜组织总RNA、纯化mRNA。采用抑制性消减杂交技术进行视网膜组织差减文库的构建及初步筛选。采用532-二极管激光光凝大鼠左眼制作慢性高眼压视网膜损伤模型。采用高密度Oligo基因芯片筛选大鼠慢性高眼压视网膜损伤差异基因。
结果:抑制性消减杂交共筛选出兔眼慢性高眼压下视网膜组织差异表达基因41个,其中上调基因片段11个,下调基因片段30个。采用高密度表达谱基因芯片,检测了大鼠高眼压时视网膜的基因表达情况,共找到差异表达基因1692个:高表达的基因719个(Ratio≥2),包括6个过表达基因(Ratio≥7);低表达的基因973个(Ratio≤0.5)。 对高表达的719个基因进行了功能检索、分组,其中54%的基因的功能完全未知。将功能已知或者部分已知的基因共分为14组,最多的功能组是代谢组和物质转运组。
结论:在慢性高眼压情况下视网膜神经节细胞赖以生存的微环境发生了改变,这种改变对剩余的神经元有害,视网膜旺盛的物质代谢和转运是慢性高眼压情况下基因表达改变的主流。对60%表达基因的功能不知说明需要从宏观和功能基因组水平认识复杂生命现象的必要性。
|