目的:探讨牛磺酸诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)分化为感光细胞的实验条件,并鉴定其生物学特性。方法:从胎儿脐血中分离出MSCs进行原代培养,待细胞融合时,按1︰2的比例进行传代。取第3代脐血MSCs用流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原CD90、CD29、CD34、CD44、CD45的表达。另取原代脐血MSCs,弃去原基础培养基,换成最小必需培养基(含1%FBS、青霉素G105U/L、链霉素100mg/L、牛磺酸50umol/L)继续培养8–10d,固定细胞,应用细胞免疫化学方法观察神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白2(MAP2)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、视紫红质(RHOS)、蛋白激酶C(PKC)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果:脐血经分离、培养5–7d后有间充质样细胞贴壁,3–4周后,细胞生长达80%–90%融合,形态学类似骨髓源性MSCs。连续传至5代以后,增殖能力未见明显减弱。脐血MSCs的大部分细胞(>90%)处于G0/G1期,且均一稳定地表达MSCs的相关抗原CD29、CD44、CD90,但不表达CD34、CD45。经牛磺酸体外诱导后的脐血MSCs对NSE、RHOS、Nestin均有不同程度的阳性表达,而GFAP、PKC、MAP2不表达。结论:脐血中含有MSCs,可在体外纯化增殖,经牛磺酸体外诱导能使部分MSCs向感光细胞分化,该技术有望为修复视网膜光化学损伤性疾病提供一种新的思路。
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