目的:制备opticin特异性抗体,通过牛眼及人眼玻璃体提取物Western blot验证该抗体的有效性。运用该抗体检测opticin在牛眼及人眼内的分布。推测其可能功能。方法:将合成的多肽链(CLPRLPIGRFT)免疫兔以获得OPT-C抗体。向牛眼及人眼玻璃体离心后获得的胶原球中加入5×凝胶加样缓冲液,煮沸后即获得玻璃体提取物,该提取物被用来进行SDS-PAGE和Western Blot。用免疫组织化学方法检测opticin在牛眼及人眼中的分布。结果:牛眼玻璃体提取物Western blot在40—50KDa可看到2个清晰可辨的分离的条带。牛眼免疫组织化学发现opticin存在于牛眼视网膜,玻璃体和睫状体无色素上皮中。人眼玻璃体提取物Western blot在45—50KDa可看到一个宽范围的条带。人眼免疫组织化学发现opticin存在于人眼视网膜,玻璃体和睫状体无色素上皮中。结论:OPT-C抗体Western blot检测到的蛋白条带在分子量大小上与国外文献报道牛眼及人眼opticin分子量大小相符,提示制备的抗体是有效的。有学者通过实验推测opticin可能由睫状无色素上皮细胞分泌,本实验结果支持这一推测。Opticin与玻璃体胶原纤维相连,可能与玻璃体结构的稳定有关。
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