| 目的 观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因(E.coli.CD)系统对人眼球筋膜囊成纤维细胞（HTFs）增殖抑制作用。方法 构建含CD基因的逆转录病毒载体pL(cd)SN并转入包装细胞系PT67进行病毒包装，G418筛选抗性克隆并扩大培养收集病毒上清，测定病毒滴度。透射电镜鉴定病毒颗粒；PCR鉴定CD基因在病毒基因组中的整合。病毒感染HTFs细胞，G418筛选并扩大培养，RT-PCR检测CD基因的表达；加不同浓度前药5-氟胞嘧啶（5-FC）后，MTT法检测CD基因对HTFs细胞的增殖抑制作用及旁观者效应。结果 酶切鉴定结果显示成功构建了逆转录病毒载体pL(cd)SN，电镜下包装细胞产生的病毒颗粒呈椭圆形、直径约100nm；病毒基因组中，PCR扩增出了CD基因；测得病毒滴度为8×106 cfu/ml；，RT-PCR检测到被转染HTFs细胞中CD基因mRNA表达；CD/5-FC系统对HTFs细胞的增殖抑制作用表现为剂量依赖性，1500µg/ml作用5天细胞几乎全部死亡，IC50为400µg/ml，并观察到旁观者效应，转基因细胞占40％时，可使近50％的未转基因细胞杀死。结论 E.coli.CD基因系统能有效抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖，此系统只作用增殖分裂细胞，作用具有靶向性。 |
