目的:研究IGF-Ⅰ对体外培养豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblasts,GSF)的影响,从而探讨IGF-Ⅰ与近视发生机制的关系。
方法:随机选取健康三色出生1-3天的豚鼠,雌雄兼用,体重80-120g。体外培养GSF,依次进行原代GSF的形态学观察,GSF的鉴定。取3-6代的细胞进行药物试验,利用MTT法观察IGF-Ⅰ对体外培养GSF的增生时间,剂量效应关系,用氯胺T 法检测胶原蛋白的合成影响以及ELISA法检测培养细胞MMP-2和TIMP-2表达水平。
结果:
1.与对照组相比IGF-Ⅰ在10.00 ng.ml-1-200.00 ng.ml-1浓度范围内与GSF的增生呈剂量效应关系(P<0.05),并在100.00 ng.ml-1浓度时促进增生作用最显著(P <0.01)。
2.从第二天开始试验组和对照组相比IGF-Ⅰ对巩膜成纤维细胞有显著促增生作用(P<0.05)。
3.与对照组相比浓度为10.00 ng.ml-1-200.00 ng.ml-1的IGF-Ⅰ能有效刺激巩膜成纤维细胞胶原蛋白合成,并呈剂量效应关系,当浓度为50.00 ng.ml-1时作用达到饱和。
4.IGF-Ⅰ在浓度为50.00 ng.ml-1时与对照组相比明显降低巩膜成纤维细胞MMP-2蛋白的表达(P<0.05),在100.00 ng.ml-1-200.00 ng.ml-1时下降更为明显(P <0.01)。而TIMP-2的蛋白表达在浓度5.00 ng.ml-1-200.00 ng.ml-1范围内表达没有明显改变。
结论:
1.IGF-Ⅰ可以显著刺激GSF的增生,并呈时间剂量效应依赖关系。
2.IGF-Ⅰ在一定浓对范围内随着浓对增加能有效促进巩膜成纤维细胞胶原蛋合成。
3.IGF-Ⅰ在一定浓对范围内随着浓度的增加能够抑制MMP-2蛋白的表达,而对TIMP-2蛋白表达作用不明显。
4.在哺乳类动物形觉剥夺敏感期补充外源性的IGF-Ⅰ可能会在一定程度上减缓形觉剥夺性近视的发展。
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