目的:视紫红质(Rhodopsin)和胞内视黄醛结合蛋白(cellular retinal-binding protein,CRALBP)是视网膜感光细胞和视网膜色素上皮细胞重要的功能蛋白,在研究视网膜细胞功能变化中是重要的观察指标。本研究旨在探讨对视网膜石蜡切片进行免疫组化检测时,这两种抗原的修复方法,并观察脱色素对抗原表达检测的影响。
材料与方法:
1) 新西兰白兔3只,取单侧正常眼。4%多聚甲醛固定,冰冻切片,Rhodopsin和CRALBP免疫组化,DAB显色。
2) 青紫兰兔6只,取单侧正常眼。多聚甲醛与戊二醛的混合液固定,石蜡切片,脱色素,分别采用微波法、高温水浴法、高压法及胰酶消化法等抗原修复方法进行Rhodopsin和CRALBP免疫组化,DAB显色观察。
将各种抗原修复后的免疫组化效果进行比较,并与冰冻切片的结果进行对比。
结果:
4种抗原修复方法中,微波和高温水浴的方法效果不稳定,背景干扰大并有组织脱失。高压法虽然抗原修复效果较好,背景干扰小,但组织也易脱失。而胰酶抗原修复的效果最稳定,抗原表达强,背景清晰,组织破坏不明显。
结论:
对兔视网膜石蜡切片Rhodopsin和CRALBP的免疫组化检测,采用胰酶进行抗原修复,是一种稳定可靠的方法。该技术可用于对视网膜感光细胞和RPE细胞的功能研究。
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