| 目的 构建人神经生长因子两种活性形式（NGF和β-NGF）的基因重组真核表达载体，为进一步的转基因实验研究作好前期准备。
方法 根据人NGF和β-NGF的全长基因序列设计合成特异性引物；采用RT-PCR从胎儿脑组织中克隆出NGF基因片段；从成人外周血中提取基因组DNA后克隆出人β-NGF基因片段；分别将他们连接于真核表达载体pcDNA4上，构建成重组真核表达载体pcDNA4–NGF和pcDNA4-β-NGF上；转入JM109大肠杆菌中扩增后小剂量质粒提取，酶切鉴定及计算机自动测序。
结果 PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示在预期位置有阳性条带；酶切鉴定结果及计算机自动测序证实插入片段为目的基因片断。
结论 通过不同的途径获得人神经生长因子两种活性形式，分别构成重组真核表达载体，为进一步的转基因实验研究打下基础。 |
