| 目的 制备含大鼠BDNF基因的逆转录病毒，建立荧光定量PCR测定滴度的方法。
方法 扩增BDNF基因，构建重组质粒pLXSN-BDNF，将其转染包装细胞，经G418筛选、病毒浓缩后用荧光定量PCR法和克隆形成法测定滴度。
结果 经PCR、酶切和测序鉴定，BDNF基因成功插入逆转录病毒载体中，筛选得到稳定的分泌重组病毒细胞系。重组病毒100倍浓缩后经荧光定量PCR法和克隆形成法测定的滴度分别为6.92×106copies•ml-1和3.2×105CFU•ml-1，两种方法测得的结果差异有统计学意义(P< 0.05)。
结论 成功扩增BDNF基因，制备了重组病毒pLXSN-BDNF，建立了荧光定量PCR检测滴度的方法，为基因治疗青光眼性视神经损伤的实验研究提供重要参考指标。 |
