| 目的：探讨人羊膜上皮细胞体外重建角膜上皮的可能性。方法：取足月产人羊膜，通过胶原酶II、胰蛋白酶和EDTA消化获得人羊膜上皮细胞，将细胞在体外培养扩增、传代，每天在倒置显微镜下观察。将2-3代人羊膜上皮细胞，接种于去上皮的兔角膜基质上培养，待细胞融合形成单层后，置于插入式培养皿中进行气液界面培养14天。对角膜基质上培养的上皮细胞进行HE、扫描电镜、透射电镜进行形态学及超微结构观察，以及角蛋白K12的免疫组织化学检测。结果：人羊膜上皮细胞可在体外成功培养及传代，在体外可传6-8代。培养的人羊膜上皮细胞呈扁平不规则多角形，轮廓清晰，胞浆丰富，胞核呈圆形、卵圆形。人羊膜上皮细胞可在兔角膜基质上生长，培养1-2天可形成单层，气液界面培养14天可形成4-5层细胞的复层上皮，扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛，透射电镜下可见上皮细胞之间有桥粒连接，免疫组化检测复层细胞表达角蛋白K12，所形成的复层结构与正常角膜上皮相似。结论：人羊膜上皮细胞有可能用于组织工程角膜上皮重建。
本课题受以下基金资助：广东省重大科技计划项目（2003A3020104），国务院侨办重点学科基金项目（51205004） |
