| 目的：探讨C57BL/6小鼠视网膜色素上皮细胞（RPE）的原代培养方法，为进一步研究RPE的功能提供条件。方法：鼠龄4周的C57BL/6小鼠，雌雄不限，颈部离断法处死后取出眼球，放入含有D-Hank液的瓶中，置于冰上3小时，于解剖显微镜下沿角巩膜缘处环形剪开眼球,去除眼前节及视网膜神经上皮层，加入0.2%胰蛋白酶于37℃培养箱内消化1小时后加入含血清培养液中和，于解剖显微镜下用1ml注射器轻轻吹打眼杯4-5次后，收集液体，吹打，离心，细胞计数后接种于培养瓶中，加入含20%胎牛血清及双抗的F12培养液培养，当细胞达到80%融合时用0.2%的胰蛋白酶加0.02%EDTA消化、传代。用第3代细胞制作细胞爬片后，以抗鼠角蛋白免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定。结果：倒置相差显微镜下观察，接种48-72小时后细胞贴壁，部分细胞伸展，呈多边形，不规则，细胞质内布满黑色素，数代后色素消失。免疫细胞化学染色显示RPE细胞胞浆内角蛋白阳性，证实为RPE细胞。讨论：C57BL/6小鼠已被用于制造多种视网膜疾病的动物模型，成功体外培养C57BL/6小鼠RPE细胞，为RPE的功能研究以及其在病理条件下在体内可能发生的功能改变提供了实验基础。 |
