| 目的：研究RNA干扰阻断人角膜基质细胞TLR2表达对茄病镰刀菌诱导的炎性细胞因子表达的影响。
方法：设计靶向人TLR2的siRNA（small interference RNA）序列，连接入p-silencer 2.0 U6载体构建能表达TLR2-siRNA的质粒。设500nmol/L和1000nmol/L质粒两个浓度组分别转染永生化人角膜基质细胞，利用免疫荧光、RT-PCR及Western blot检测TLR2的表达以观察其抑制效果并筛选适宜浓度。制备茄病镰刀菌菌丝和孢子并分别刺激转染siRNA的角膜基质细胞及未转染对照细胞，刺激12h后利用实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10及IFN-γ的表达，观察干扰TLR2表达对角膜基质细胞产生炎性细胞因子的影响。
结果：TLR2-siRNA质粒转染人角膜基质细胞后，TLR2 mRNA及蛋白水平表达均明显被抑制，其中500nmol/L组抑制效率达60-65%，1000nmol/L组抑制效率为40-55%。分别使用茄病镰刀菌菌丝及孢子刺激后，对照组IL-1β及IL-10的表达均明显上调，IFN-γ表达轻度上调，且菌丝诱导的表达上调比孢子更显著；RNA干扰组，IL-10及IFN-γ的表达较对照组明显降低，分别下调70-80%和60-70%，IL-1β的表达亦有一定程度降低，约下调50%左右。
结论：TLR2介导茄病镰刀菌诱导的角膜基质细胞炎性细胞因子的表达，干扰TLR2的表达能显著抑制角膜基质细胞炎性因子的产生，减轻炎症反应。
注：国家自然科学基金项目（30571997）资助课题
|
