| 目的 验证BAX基因过表达对HLECs凋亡的作用。
方法 体外培养人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells, HLECs）系SRA01/04，将携带BAX基因的质粒C3-EGFP- BAX 用Nucleofector法对其进行转染，用细胞计数法检测转染效率。转染后48hr，用荧光定量RT-PCR的方法检测BAX基因mRNA的表达，Western免疫印迹法、细胞免疫荧光法检测BAX蛋白的表达，用同样的方法检测BCL2基因表达的情况。BAX基因转染后，使用流式细胞仪Annexin V染色法检测转染成功的HLECs的死亡情况，相差显微镜和荧光显微镜观察HLECs的形态改变，Hoechst染色法观察HLECs核的改变，透射电镜观察HLECs超微结构的变化，Western免疫印迹法检测活化型caspase 3蛋白表达的变化。
结果 Nucleofector法转染HLECs的效率为78.3%±17.5%。C3-EGFP-BAX质粒转染HLECs后，BAX基因的表达增强，BAX基因和BCL2基因表达量的比例BAX /BCL2也明显升高，但BCL2基因的表达无明显变化。BAX基因转染后，转染成功的HLECs的死亡率约为40%，转染空质粒的细胞的死亡率约为30%，两组相比差异有统计学意义（P<0.05），不同时间点的死亡率的差别无统计学意义（P>0.05）。形态学的方法观察到经BAX基因转染的细胞其生长状态差，轮廓模糊，细胞核变小，核染色质固缩、边集，并可见核碎裂。Western免疫印迹法检测到HLEC-EGFP-BAX组活化型caspase 3的表达量是HLEC-EGFP组的2.44倍，差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论 BAX基因转染可以诱导HLECs死亡，死亡的主要方式是凋亡。 |
