| 目的：以ITS区基因为靶标，设计针对不同菌种的寡核苷酸探针，利用荧光和生物素两种标记，通过杂交反应对真菌性角膜病进行临床快速诊断。方法: 针对我国临床上常见的角膜致病真菌6属12种，包括腐皮镰孢菌、串珠镰孢菌、梨状镰孢菌、尖孢镰孢菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌、土曲霉菌、黑曲霉菌、新月弯孢菌、牵连青霉菌、链格孢霉菌、白色念珠菌，利用荧光和生物素两种标记，设计合成一系列ITS探针，以18rRNA和28rRNA通用引物对82株临床分离株样本和170例临床采集样本进行PCR扩增，将扩增产物与探针杂交，观测荧光或显色情况，并与KOH涂片法和真菌培养法鉴定结果进行统计学比较。结果：1.在对82株临床分离株样本检测中，荧光探针检出73株符合率为89.0%，生物素探针检出69株符合率为84.1%，结果无显著性差异(χ2=0.840, P=0.359>0.05)。2. 170例临床角膜刮片标本，KOH涂片法检测阳性113例，阳性率为66.5%；真菌培养法阳性153例，阳性率为90.0%；荧光探针检测阳性147例，阳性率为86.5％；生物素探针检测阳性143例，阳性率为84.1%。荧光探针检测与生物素探针检测结果无显著性差异（χ2＝2.611，P＝0.106>0.05）；荧光探针检测与KOH涂片结果具有显著性差异（χ2＝18.896，P＝0.00<0.05），与真菌培养法结果无显著性差异（χ2＝1.020，P＝0.4>0.05）；生物素探针检测与KOH涂片法结果具有显著性差异（χ2＝14.230，P＝0.00<0.05），与真菌培养法结果无显著性差异（χ2＝2.611，P＝0.106>0.05）。3. 荧光探针杂交结果与真菌培养结果一致性比较高度符合（Kappa值＝0.80），生物素探针杂交结果与真菌培养结果一致性比较接近高度符合（Kappa值＝0.759）。结论：以ITS区基因为靶标的寡核苷酸探针检测系统与传统的实验室检测手段比较，具有较好的特异性和灵敏度，大大缩短了检测时间，为真菌性角膜病的临床快速诊断提供帮助。 |
