目的:研究人视网膜前体细胞移植于正常大鼠玻璃体腔内的存活迁徙与分化。
方法:人视网膜前体细胞来源于7-20周人工流产胚胎眼神经视网膜组织。收集第二代对数生长期细胞,采用磷酸钙转染法将绿荧光蛋白EGFP质粒基因行细胞转染48h,调整细胞浓度为2×105/100ul,用显微注射器将3.0μl细胞悬液注射到健康雄性SD大鼠(体重200-250g)玻璃体腔。于移植后7天行移植眼球连续冰冻切片,荧光显微镜下观察移植细胞在眼内的存活与迁徙。采用荧光免疫细胞化学染色方法,激光共聚焦显微镜下观察移植细胞在眼内的分化。结果:转染EGFP人视网膜前体细胞在正常成年大鼠玻璃体腔移植术后7天,在宿主玻璃体腔内观察到较大体积的细胞团,细胞团中央无明显结构,表面见荧光细胞成簇和/或散在分布于玻璃体腔中。在宿主视网膜中未观察到明显的荧光标记细胞。免疫荧光化学染色显示移植细胞表达Nestin、Pax6、Map2、GFAP、Thy-1、Rhodopsin等细胞标志蛋白。结论:转染EGFP人视网膜前体细胞移植于正常成年大鼠玻璃体腔能够存活与分化。未发现移植细胞向视网膜内的迁徙。
|