目的:为研究恒河猴表皮干细胞是否具有胚胎干细胞的多向分化潜能,从而为细胞移植治疗寻找无免疫排斥和成瘤性的种子细胞。方法:消化法分离培养表皮细胞,IV胶原初步分选表皮干细胞,并利用细胞周期,RT-PCR和免疫组化方法进行鉴定。利用显微注射针根据细胞直径进行再次分选,将分选后的均一小细胞注射到小鼠囊胚;将注射后的囊胚移植到假孕母鼠子宫进行发育,产生嵌合体的胚胎和动物。分别用PCR和荧光原位杂交的方法进行鉴定。结果:IV胶原分选后的细胞符合表皮干细胞的特性;共进行了360鼠次的胚胎移植,共得到8只成型的胚胎和3只存活的嵌合体小鼠;PCR检测发现在2只嵌合体小鼠和4只胚胎中发现了阳性信号;在死胎的各器官中用巢式PCR方法检测到阳性信号;FISH检测方法在小鼠的肝脏中找到了恒河猴来源的细胞结论:恒河猴表皮干细胞具有可塑性,可以分化为肝脏细胞。本课题受:国家自然科学基金项目(NO.30672275、NO.30271386、NO.30300380) 卫生部临床学科重点项目(NO.3030902005)资助 |