| 目的：研究myocilin 基因Pro370Leu突变对体外培养人小梁网细胞单层渗透性的影响。
方法：构建pIRES2-EGFP野生型和Pro370Leu突变型myocilin真核表达载体，用G418筛选建立稳定表达细胞系；将稳定表达野生和Pro370Leu突变型myocilin蛋白的人小梁网细胞与正常人小梁网细胞共培养，检测myocilin蛋白对人小梁网细胞外基质成分纤维连接蛋白表达的影响；提取myocilin蛋白并联合其他细胞外基质成分，检测人小梁网细胞的黏附性；纤维连接蛋白的表达和分布用蛋白质印迹法和免疫荧光纤维技术进行检测；人小梁网细胞在transwell膜上生长达到单层完全融合后进行体外渗透性分析和经细胞电阻测定。
结果：myocilin与纤维连接蛋白共定位并具有对细胞外基质的去黏附特性；Pro370Leu突变型myocilin抑制野生型myocilin蛋白的分泌且纤维连接蛋白表达增加；Pro370Leu突变型myocilin转染的人小梁网细胞跨细胞电阻和单层细胞渗透性增加。
结论：myocilin蛋白通过与纤维连接蛋白的相互作用减弱了人小梁网细胞对细胞外基质的黏附性；Pro370Leu突变型myocilin增加纤维连接蛋白表达并抑制了人小梁网单层细胞渗透性。
本课题受以下基金资助：国家自然科学基金项目（No.30271386、No.30300380、No.30400486）卫生部临床学科重点项目（No.3030902005）广东省自然科学基金项目（No.36649、No.021823）。
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