| 目的：探讨采用新型阳离子纳米聚合物介导靶向IKKB基因的siRNA进入体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞，进而抑制人Tenon’s囊成纤维细胞的增殖，探索预防青光眼术后滤过道瘢痕形成的新方法。
方法：将靶向IKKB基因的siRNA与阳离子纳米聚合物CS-g-(PEI600-g-PEG)以10/1的N/P比结合后，流式细胞仪检测其转染siRNA的效率。然后分别以不同浓度（5nM, 10nM, 25nM, 50nM, 100nM）的IKKB-siRNA转染体外培养人Tenon’s囊成纤维细胞，同时设转染100 nM No-target siRNA的阴性对照组和正常对照组。用Real time RT-PCR法检测RNA干扰24小时后IKKB的mRNA表达水平；用Western blot法检测RNA干扰72小时后IKKB的蛋白表达水平；免疫细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测RNA干扰72小时后NF-κB活性的变化；用Cell Titer 96®细胞增殖检测试剂盒检测人Tenon’s囊成纤维细胞的增殖程度。
结果：化学成分为CS-g-(PEI600-g-PEG)的阳离子纳米聚合物作为微载体介导siRNA进入人Tenon’s囊成纤维细胞的转染效率为84.5%，接近商品化脂质体转染剂Lipofectamine 2000。转染IKKB-siRNA 24小时后，IKKB的mRNA表达水平随转染siRNA浓度的增加而降低；转染IKKB-siRNA 72小时后，IKKB的蛋白表达水平亦随转染siRNA浓度的增加而降低；靶向IKKB基因的RNA干扰后，NF-κB的活化受到了抑制，活化并进入细胞核内的NF-κB显著减少；细胞的增殖程度随转染siRNA浓度的增加而降低，呈浓度依赖性变化（p<0.05），siRNA浓度为50 nM时达到最大抑制率。
结论：新型阳离子纳米聚合物CS-g-(PEI600-g-PEG) 作为微载体介导siRNA进入人Tenon’s囊成纤维细胞，具有较高的转染效率；靶向IKKB基因的RNA干扰，可以高效抑制IKKB的表达，进而调控NF-κB的活性；通过靶向IKKB基因的RNA干扰，能够抑制体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的增殖。
本研究受教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助（NO. 20060558035）。
|
