目的:白内障(cataract)是世界首位致盲原因,氧化损伤是年龄相关性白内障发生的关键环节。原花青素(Procyanidins,PC)是植物中广泛存在的天然抗氧化物质,是一大类多酚类化合物的总称。原花青素是一种很强的抗氧化剂,能够清除自由基以及抑制脂质过氧化反应。本实验观察原花青素对氧化损伤晶状体的形态学及抗氧化系统的影响,研究原花青素对晶状体氧化损伤的保护作用,为白内障的药物治疗提供理论基础和实验依据。
方法:将健康成年兔晶状体随机分成4组,Feton模型组 (氧化损伤组)、维生素C组(100mg/L)、维生素E组(100mg/L)、原花青素组(依浓度分为50mg/L、100mg/L、200mg/L三组)。体外培养24h后,分别观察晶状体大体混浊情况,光镜下观察组织形态学变化,检测各组晶状体抗氧化防御系统、水溶性蛋白水平及脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)含量。
结果:1、各组晶状体有不同程度混浊,用图片编辑器 Image Pro Plus 5.0 软件包分析图像灰度,Feton组和VC组较其它组相对灰度值减小(P<0.05),而原花青素组与维生素E及原花青素各浓度组间混浊情况均无统计学差异。
2、光镜下,Feton模型组:晶状体前囊膜增厚,囊膜下为一层无形态物质,晶状体上皮细胞增殖,排列紊乱,细胞体积变大,胞核多形。晶状体纤维板层结构紊乱,纤维间较多囊泡及水裂,囊泡自囊膜下逐渐融合扩大成空泡向深层扩展。 维生素C组:晶状体前囊膜增厚,晶状体上皮细胞基底部与晶状体前囊膜广泛剥离。细胞间排列较疏松,间距不一,层次紊乱。晶状体纤维间偶有空泡形成。维生素E 组:晶状体前囊膜呈染色浅淡的均质膜,完整连续,囊膜下有囊泡。晶状体上皮细胞体积有增大,部分晶状体上皮细胞被挤至较深层次。原花青素组:晶状体前囊膜连续光滑,晶状体上皮细胞基底部与顶部分别与晶状体前囊膜和晶状体纤维板层紧密连接,囊膜下及细胞间无囊泡形成,晶状体上皮细胞排列较整齐,核形态一致。晶状体纤维板层间排列紧密而规整,无空化及水裂。
3、原花青素组的WSP、GSH-PX及T-AOC水平明显高于Feton组、维生素C组和维生素E组(P<0.01),MDA含量则明显低于这三个对照组(P<0.01)。SOD含量中,原花青素100mg/L、200mg/L组明显高于三个对照组(P<0.01),而原花青素50mg/L组明显高于Feton组、维生素C组 (P<0.01),且也较维生素E组高(P<0.05)。原花青素200mg/L组CAT含量组明显高于Feton组、维生素C组 (P<0.01),100mg/L组也较Feton组、维生素C组高(P<0.05),而原花青素50mg/L组只高于Feton组 (P<0.05)。原花青素各浓度组间比较发现,100mg/L、200mg/L组SOD含量明显高于50mg/L组 (P<0.01),且200mg/L组GSH-PX含量也高于50mg/L组 (P<0.05)。另外,维生素E组中SOD、GSH-PX含量也明显高于Feton组、维生素C组 (P<0.01),且MDA含量低于Feton组(P<0.05),T-AOC也较Feton组、维生素C组提高(P<0.05)。维生素C组和Feton模型组各项指标中均无显著性差异(P>0.05)。
结论:1、原花青素可提高氧化损伤晶状体的抗氧化能力,减轻兔晶状体氧化损害,维持晶状体的透明性。2、原花青素作用于晶状体后,SOD、GSH-PX、CAT及T-AOC水平都有提高,WSP含量增加, MDA的含量降低。能明显降低脂质过氧化物水平,减少白内障发生。3、维生素C、维生素E也表现出一定的抗氧化能力,但原花青素有比维生素C、维生素E更强的抗氧化能力。4、本研究显示,原花青素能有效保护实验晶状体的氧化损伤,在细胞生物学水平及组织器官水平有特异的表现。目前尚未见原花青素有毒副作用的报道。因此,这就为进一步治疗及预防老年性白内障的药物研究提供了理论基础和实验依据。
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