| 目的 检测Behcet病患者对视网膜S抗原（S-Ag）的反应性，探讨S-Ag特异性T细胞的表型及功能特点，并鉴定其免疫表位。方法 首先合成40条覆盖人视网膜S抗原序列全长的重叠肽，每条肽长20个氨基酸，依次重叠10个氨基酸。分离活动期、静止期Behcet病患者、健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC），经S-Ag混合肽刺激，应用ELISPOT法检测IFN-γ分泌细胞的数量以鉴定T细胞对S-Ag的反应性，同时确定抗原特异性T细胞的频率；应用ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ的表达，从整体水平验证抗原反应性。应用胞内细胞因子染色法检测S-Ag特异性细胞的表型特征，应用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、TNF-α、IL-4、IL-17的水平，应用ELISPOT法筛选Behcet病患者的S-Ag免疫表位。结果 59.1％活动期Behcet病患者（共22个）、27.3％静止期Behcet病患者（共11个）的PBMCs对S-Ag的刺激产生不同程度免疫反应，活动期及静止期患者S-Ag特异性T细胞的频率相同，正常人对S-Ag均无反应。PBMCs对S-Ag混合肽的反应性在单细胞水平和整体水平保持一致。流式检测到的4个Behcet病患者的S-Ag特异性细胞均为CD4+ T细胞，50％以上为活化的记忆性T细胞。S-Ag刺激作用下，PBMCs中TNF-α的表达明显上调，IL-17的表达无明显变化，IL-2、IL-4的表达低于检测水平。Behcet病患者对不同浓度的多个S-Ag单肽发生反应，各患者间的T细胞表位谱不一致。结论 S-Ag参与了大部分Behcet病患者葡萄膜炎的复发病理过程，S-Ag特异性细胞主要是活化的记忆性CD4+T细胞，通过介导经典的Th1型免疫反应发挥效应。Behcet病中存在多个S-Ag的T细胞免疫表位，患者的T细胞表位谱具有高度异质性。 |
