目的 葡萄膜炎是一类病因复杂的致盲性眼病,研究表明有多种细胞因子参与其发病过程。白介素-10(interleukin-10,IL-10)作为一种抗炎物质,可抑制辅助性T细胞产生细胞因子及其活性,在多种炎症中发挥重要保护作用。本研究应用大肠杆菌内毒素(lipopoly- saccharide,LPS)建立Wistar大鼠的内毒素诱导的葡萄膜炎模型(endotoxin-induced uveitis,EIU),观察IL-10对临床表现、组织学改变以及对眼内液和血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、IL-6和IL-10水平的影响,探讨IL-10对EIU的治疗作用。
方法 选择6~8周龄的雄性Wistar大鼠60只,随机分为IL-10治疗组(24只)、EIU组(阳性对照组,24只)和空白对照组(12只)三组。治疗组和EIU组大鼠双后足垫注射LPS 300μg诱导EIU,治疗组大鼠在注射LPS前4小时和0.5小时按1μg/kg体重尾静脉注射重组IL-10两次,空白对照组大鼠双后足垫注射无菌生理盐水。免疫大鼠后每2小时进行裂隙灯显微镜和眼底镜观察,详细记录其发病时间、高峰时间、炎症持续时间和临床表现,根据临床评分标准对大鼠眼部炎症进行评分。分别于免疫后4小时、24小时和3天从大鼠内眦静脉丛取血,处死大鼠后取眼球,一只眼球取眼内液进行细胞因子测定,另一只眼球做常规病理切片,光学显微镜下观察病理改变,并参照病理学分级标准对大鼠病理学改变进行分级。应用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清和眼内液中的TNF-α、IL-6和IL-10水平。
结果 EIU组大鼠注射LPS后2~4小时即出现眼部炎症反应,然后逐渐加重,于24小时达到高峰,表现为前房闪辉、细胞、纤维素样渗出、瞳孔膜闭和玻璃体混浊。24小时的组织学表现为虹膜血管扩张充血,前房、虹膜睫状体、视网膜以及玻璃体腔有大量粒细胞、单核细胞和淋巴细胞浸润。治疗组大鼠葡萄膜炎炎症明显轻于EIU组,临床评分和组织学分级显著减轻。EIU组大鼠血清及眼内液TNF-α水平均明显高于空白对照组和治疗组大鼠(F= 13.77/26.77,p<0.01),EIU组大鼠血清和眼内液IL-6水平均高于空白对照组和治疗组大鼠(F=12.65,p<0.01),治疗组大鼠血清IL-10水平明显高于EIU组和空白对照组(F=8.96,p<0.01),眼内液IL-10水平与EIU组差异没有统计学意义(F=2.04,p>0.05)。眼内液TNF与眼部炎症程度存在正相关(r=0.707,p<0.01),血清和眼内液IL-6水平与眼部炎症严重程度呈正相关(r=0.687,r=0.672,p<0.01),眼内液IL-10水平与眼部炎症程度存在负相关。
结论 IL-10作为炎性细胞因子生成抑制因子,能显著抑制内毒素诱导的葡萄膜炎模型中的前炎症因子TNF-α和IL-6产生,降低其在血清及眼内液中水平,减轻EIU的眼组织病理损害,具有治疗EIU作用,这为临床葡萄膜炎的免疫治疗提供了直接的证据。
|