目的:构建针对大鼠ICOS基因的特异性RNA干扰质粒,并进行鉴定。方法:采用U6启动子,分别把被9bp序列间隔的19bp长短的ICOS靶序列的反向重复序列,连接到线性化处理的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒中,分别构建ICOS短发夹环RNA(ShRNA),产生重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS。结果:将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,并作测序分析,经测序鉴定确定为所需序列。结论:针对大鼠ICOS基因的特异性RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS的成功构建,为进一步研究阻断ICOS表达对EAU的影响奠定基础。
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