| 目的 构建针对大鼠共刺激分子ICOS基因的特异性RNA干扰质粒，转染T细胞后鉴定其对ICOS表达的意志效果。方法 设计大鼠ICOS的干扰序列，采用DNA载体介导的RNA干扰技术构建大鼠ICOS基因的特异性RNAi质粒（pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA）转染T细胞后，通过Realtime PCR，免疫印迹法对pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA的抑制效率进行鉴定。结果 构建了三段针对大鼠ICOS目的基因的特异性RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS，分别转入大鼠T细胞后均可降低ICOS的表达，其中尤以靶向（+252-+270）位点的质粒干扰效率最高，达到50%以上。结论 大鼠ICOS基因的特异性干扰质粒（pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA）能从蛋白及mRNA水平上特异和高效的抑制ICOS基因的表达。这种DNA载体介导的双链RNA干扰质粒为进一步研究ICOS蛋白在EAU中的表达及阻断ICOS表达对EAU病程的影响并进而明确ICOS在EAU中的作用提供了坚实的基础。
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