| 目的
研究体外视网膜色素上皮（retinal pigment epithilial ,RPE）细胞凋亡模型中，各线粒体凋亡途径指标（细胞内活性氧（reactive oxygen species ,ROS）、线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）、细胞色素C（Cytochrome C）和线粒体超微结构）的变化，以及它们在细胞凋亡中所起的作用；评价褪黑激素的细胞线粒体保护和抗凋亡作用。
方法
以过氧化氢（H2O2）诱导建立体外RPE细胞凋亡模型；通过检测细胞内ROS的产生与定位（H2DCFDA和MTR双标记法）、mtDNA的完整性（PCR法）、Cytochrome C在线粒体与胞质中的含量（蛋白印迹法）和细胞线粒体结构的变化（电镜观察）这些指标来分析凋亡模型中细胞线粒体的功能状况；通过流式细胞+PI染色、TUNEL+PI染色检测细胞凋亡；并且分析线粒体指标和凋亡的关系；然后观察在不同剂量、作用时间、给药方式及预处理条件的MLT干预下各指标的变化，评价MLT的线粒体保护和抗凋亡作用。
结果
模型中RPE细胞随H2O2剂量增加和作用时间延长，ROS产生增加，并以线粒体为其主要产生部位；mtDNA整体完整性下降，出现大片段丢失；线粒体Cytochrome C释放增加；细胞及其线粒体形态发生趋向于凋亡的改变；并且RPE细胞凋亡发生比例逐渐提高。一定条件（剂量、作用时间、给药方式及预处理）的MLT干预能有效减少ROS产生，减轻mtDNA损伤，减少Cytochrome C释放，细胞及线粒体形态趋于正常化；同时RPE细胞凋亡比例显著下降。
结论
体外RPE细胞线粒体在H2O2的作用下，形态及功能方面发生了一系列变化，最终启动线粒体途径凋亡。细胞内线粒体功能变化是细胞凋亡的重要原因。MLT的干预可以有效减少H2O2诱导的RPE细胞凋亡。MLT的抗凋亡作用部分源于其线粒体保护作用。而这一作用与MLT一定的剂量、作用时间、给药方式或预处理条件相关。
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