目的: 胶质细胞构成了视网膜的主体骨架结构,其空间构型的发育完成直接影响了视网膜内各视细胞的分群、分区与功能的实现,对于维持视网膜的形态学和结构稳定都起着重要作用。本研究旨在探讨胶质细胞发育过程中视网膜三维结构的形成,及与视网膜内各神经元的关系。
方法: 8-39孕周的人胚胎视网膜组织共25例,冰冻切片后,进行一种或多种抗体染色,免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察,截取不同的光学面,通过三维重构和动态合成再现视网膜发育过程中主体骨架结构空间结构形成和视细胞的发育。
结果:人胚25-28WG能分辨出视网膜主体骨架结构的三维空间构型。Muller细胞的终板在近玻璃体腔面紧密排列,相互融合,并最终构成了内界膜。横行走向的星形胶质细胞的足突包绕神经纤维,并与纵形走向的垂直于内界膜分布的muller细胞的足突在神经节细胞层发生交错,将神经节细胞包绕于其中。Muller细胞的细胞核分布于内核层,纵形走向的胞体在穿越视网膜的过程中发出细小的突起,与位于内、外核层的神经元细胞发生联系,构成了视网膜骨架结构的网络状连接。Muller细胞最终跨越了整个视网膜神经感觉层,分布于从内界膜到外界膜的视网膜内8层。
结论: 激光共聚焦显微镜提供了不同光学切面的清晰图像,结合相应的抗体,将不同光学切面的图像进行三维重构,可用于研究视网膜胶质细胞在发育过程中的分化、迁移,视网膜骨架结构的构成。三维重构不仅是研究胚胎视网膜发育的有效工具,也是研究视网膜空间构型变化与疾病关系的重要途径。
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