| 目的：建立一套快速、准确、简单筛查LHONmtDNA G11778A点突变的新方法，同时初步判断其异质性、野生和突变比例。方法：选择包含LHONmtDNA G11778A点突变一段核酸序列，在3’端标记MGB分子和荧光淬灭基团，野生型序列5’标记荧光报道基团VIC，变异型序列5’标记荧光报道基团FAM，同时设计一对引物，扩增区域覆盖LHONmtDNA G11778A点突变。在同一个PCR反应体系中引入上述两种探针，应用ABI7000多荧光通道PCR仪分别检测LHON家系血样和正常人血样，检测结果与核酸序列测定结果比较。结果：正常人血样检测结果，荧光PCR法检测VIC通道检测均为阳性，FAM通道检测均为阴性，判断为LHONmtDNA野生型，正常人样品测序结果均为野生型，结果完全吻合。临床可疑LHON病人及家系成员20人，测序结果表现为LHONmtDNA变异型患者12例，荧光PCR法检测FAM通道均为LHONmtDNA变异阳性，其中存在LHONmtDNA变异株和野生株混合的为5例，混合型中，变异株/野生株比例均大于4：1；测序结果表现为LHON mtDNA野生型8例，荧光PCR法检测，5例为LHONmtDNA野生型，3例为LHONmtDNA变异株和野生株混合型，混合型中，变异株/野生株比例均小于1：4。荧光定量PCR检测LHONmtDNA G11778A点突变耗时仅为80分钟，远小于测序法时间。结论： 该方法能简便、快速、准确检测LHONmtDNA G11778A点突变，非常适合临床的基因诊断；同时，该方法能判断个体异质性及野生和突变比例，对进一步探索该病是否存在mtDNA突变阈值有重要价值。 |
